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研载生物
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免疫组化
用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞的定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学(immunohistochemistry)技术或免疫细胞化学(immunocytochemistry)技术。免疫组化的特点是特异性强、定位准确,因此能够明确目的蛋白的细胞定位、亚细胞定位及多种蛋白之间的相互位置关系。免疫组化在医学上应用广泛,尤其在临床肿瘤诊断和鉴别诊断中具有普遍认可的实用价值。其应用于低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时,准确率可达50% -75%。
根据抗原抗体反应和化学显色原理,组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合,再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应,最后通过显色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分,在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物,从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。
二、实验流程
1. 石蜡切片的制作。
2. 石蜡切片的脱蜡与水化。
3. 阻断内源性过氧化物酶活性。
4. 抗原修复。
5. 封闭非特异性蛋白。
6. 一抗孵育。
7. 具有生物素标记的二抗孵育。
8. SP (链霉亲和素-过氧化物酶)反应。
9. DAB显色。
10. 复染、脱水、透明、封片。
11. 镜检,拍照。
三、服务说明及结果
1. 客户提供:组织或细胞,一抗(可代购)。
2. 公司提供:实验步骤,结果图片,结果分析。
3. 实验周期:10个工作日。
【欢迎来电/邮件咨询】
联系人:刘经理
电话:021-54376058
手机:13917998048 (7:00-24:00, 周末节假日不休)
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文献和实验一、石蜡切片和冰冻切片的比较? 1、要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片,这是我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片,可能会破坏组织的抗原性,如果组织的抗原性较稳定,则可作石蜡切片;但是要求做石蜡切片的,可作冰冻切片。 2、冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性,做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构,可能会使抗原弥散;切片厚度较石蜡的厚,做的片子没石蜡的漂亮。当你买一抗时,目录上都写着做什么样的切片,如果它写着只能做冰冻,就不能做石蜡,如写
不完全,若存在,需延长脱蜡时间或换用新的二甲苯。 (5)抗原修复不完全:对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位,以利于与抗体结合。 (6)细胞通透不全,抗体未能充分进入胞内参与反应:可加入组织透化步骤,进行细胞膜或核膜的透化。 (7)试剂盒保存不当:请于 4℃ 进行保存,勿室温防止过长时间。 (8)封闭时间过长:若使用封闭液进行封闭,请排除封闭液对抗原抗体结合的影响。 Q2:免疫组化染色弱怎么办? (1)抗体浓度过低,孵育时间过短:可提高抗体浓度,进行抗体4℃过夜孵育。 (2)组织
管树军621 各位大侠,我在论坛上看到大家检测NF/KB与IKBa用的都是WB的方法,我想用免疫组化的方法,好出结果吗,两者相比那种方法更容易出结果呢?我只想只一个好出结果的方法并且试剂相对便宜一些。谢谢!请高手指点。我的邮箱是guanshujun621@163.com 00501101 如果你是硕士的话,可以骗过国内的人,蒙混过毕业就行了 如果你是博士的话,要发SCI,请不要用组化代替wb,老外没有人这样代替











