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- 2026年01月06日
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细胞凋亡检测
细胞凋亡对胚胎发育及形态发生、组织内正常细胞群的稳定、机体的防御和免疫反应、疾病或中毒时引起的细胞损伤、老化、肿瘤的发生进展起着重要作用，并具有潜在的治疗意义，一直是生物医学研究的热点。
除了传统的凋亡细胞形态学检测，细胞凋亡的检测方法多种多样，且根据凋亡早期和晚期的样品，选择不同的检测手段。
检测细胞凋亡的方法有流式检测细胞凋亡（Annexin V/PI染色）和TUNNEL检测细胞凋亡。
磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期（或细胞损伤时），PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin V是一种Ca2+依赖的磷脂结合蛋白，具有易于结合PS的特性，可充当敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。碘化丙啶（Propidine Iodide, PI）是一种核酸染料，不能透过完整的细胞膜，但能够透过凋亡中晚期的细胞和死细胞的细胞膜，从而使细胞核染成红色。将Annexin V和PI一起使用，可以将凋亡早期、晚期的细胞以及死细胞区分开来。
实验流程
1、细胞收集
2、细胞洗涤
3、细胞标记
4、流式细胞仪分析
5、结果判断
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文献和实验References [1] Danise P, Amendola G, Di CR, et al. Nucleated red blood cells and soluble transferrin receptor in thalassemia syndromes: relationship with global and ineffective erythropoiesis. Clin Chem Lab Med. 2009. 47(12): 1539-42. STABLE
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在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。在细胞发生凋亡时，膜磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的变化，而此阶段Propidium Iodide（PI）不能通过细胞膜。细胞坏死时，虽然也会发生磷脂酰丝氨酸外翻，但此时细胞膜的通透性明显
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