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- Bio-Tc
- Ns04-08
- 洛阳
- 2025年12月19日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 抗体英文名：
Human IgG (purified)
- 宿主：
无
- 供应商：
佰泰科
- 库存：
大量
- 保质期：
3年
- 抗原来源：
无
- 级别：
亲和纯
- 是否单克隆：
多克隆
- 保存条件：
-20
- 规格：
100mg
将正常人血清通过亲和层析纯化，经低温无菌过滤制成。
人IgG纯品于0.01M PH7.4 PBS中,无任何防腐剂。
用于免疫组化化学、ELISA、CLIA、RIA等
聚丙烯酰胺凝胶电泳纯度＞９7％。
－２０℃（避免反复冻融）
1 . 将抗体结合到蛋白A或蛋白G微珠上。对于一般用途的层析柱，每毫升湿的微珠大约可以结合2mg单克隆抗体或亲和纯化的多克隆抗体。将抗体和蛋白A或蛋白G微珠混合制成稀薄的匀浆，在总量为10ml的溶液中加入大约lml微珠，室温孵育1h，轻轻摇动混匀。
2． 用10倍体积的0.2mol／L硼酸钠（pH9.0）洗涤微珠2次，每次以3000g离心2rain或10 000g离心30s。
3． 用10倍体积的0.2mol／L硼酸钠（pH9.0）重悬微珠，留取相当于10t~l湿微珠的样品。加入足量的二甲基庚二酸酯固体至微珠匀浆中，使终浓度为20mmol／L。
4． 室温孵育30min，并轻轻混匀。留取相当于10t~l偶联微珠的样品。
5． 用0.2mol／L乙醇胺pH8.0．洗涤微珠1次以终止反应。然后重悬于0.2mol／L乙醇胺，室温孵育2h，轻轻混匀。微珠用PBS洗涤后，重悬于PBS，加入硫柳汞保存。
6． 将偶联前和偶联后的微珠样品加入Laemmli样品缓冲液中煮沸后，检查偶联效果。分别取相当于1ul和9ul 2份样品在10％SDS—聚丙烯酰胺凝胶中电泳，并用考马斯亮蓝染色，偶联效果良好时，在偶联前的微珠样品中显示一条55kDa的重链带，而偶联后的样品无此区带。
7． 将抗体包被的微珠转入合适的层析柱中，用PBS冲洗容器收集残留的微珠。如果可能，仅使用结合制品中全部抗原所需的抗体微珠基质。
8． 用20倍柱床体积与制备抗原相同的缓冲液洗柱。
9． 将抗原液加到柱上，按每毫升柱体积大约lml／h的速度使抗原溶液流过层析柱，可以用一台蠕动泵控制。
10． 用20倍柱床体积的结合缓冲液（PBS）洗柱。
11． 用20倍柱床体积的预洗脱缓冲液洗柱，建议使用预洗脱缓冲液。
12． 采用分段洗脱法，连续以0.5倍柱床体积的洗脱缓冲液通过层析柱，分管收集每一组分。如果用过高或过低pH值的缓冲液洗脱，收集管内需加入0.1倍柱床体积的缓冲液。
13． 检测每管的抗原含量，将浓度高的各管合并。根据抗原的用途，需对获得的蛋白洗脱液透析以改变缓冲液。
14． 用20倍柱床体积的起始缓冲液流经基质，使层析柱再生。加入0.01％硫柳汞可长期保存（4℃）。
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文献和实验1． 将抗体结合到蛋白A或蛋白G微珠上。对于一般用途的层析柱，每毫升湿的微珠大约可以结合2mg单克隆抗体或亲和纯化的多克隆抗体。将抗体和蛋白A或蛋白G微珠混合制成稀薄的匀浆，在总量为10ml的溶液中加入大约lml微珠，室温孵育1h，轻轻摇动混匀。 2． 用10倍体积的0.2mol／L硼酸钠（pH9.0）洗涤微珠2次，每次以3000g离心2rain或10 000g离心30s。 3． 用10倍体积的0.2mol／L硼酸钠（pH
在重组蛋白纯化的过程中，研究者常常利用融合表达的各种亲和标签，通过一步法亲和纯化的方法获得自己的目的蛋白。其中，6×His•Tag标签因其氨基酸个数少、对蛋白活性影响较小、亲和纯化方便，成为大家常用的选择。但是，His Tag并非万能标签，依然有不少使用限制因素，如：对重金属离子敏感、不适合金属离子螯和层析方法的蛋白；活性不稳定的蛋白；对蛋白纯度要求更高等。所以，研究人员仍然需要不断寻找更适合自己的亲和标签。Novagen最新推出的Strep•Tag II 8氨基酸小标签，就是一个新选择
罗氏蛋白亲和纯化树脂：cOmplete His-Tag Purificatio
cOmplete His-Tag Purification Resin 灵活纯化蛋白、保证效能 选择靶蛋白适宜的缓冲条件 cOmplete His-Tag Purification Resin是一种新型的高效能IMAC基质，用于裂解液中His标签蛋白的一步法纯化，操作方便。采用罗氏特殊的镍螯合化学
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