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土壤α-葡萄糖苷酶(S-α -
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测定意义:
S-α-GC 能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键葡萄糖,是纤维素分解酶 系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
测定原理:
S-α-GC 能够催化对-XIAO基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷对-XIAO基苯酚,后者在 400nm 有特征光 吸收。土壤α-葡萄糖苷酶(Solid-α-Glucosidase,S-α-GC)试剂盒说明书 微量法 100 管/48 样 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 测定意义: S-α-GC 能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键葡萄糖,是纤维素分解酶 系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。 测定原理: S-α-GC 能够催化对-XIAO基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷对-,后者在 400nm 有特征光 吸收。 自备用品: 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、 研钵、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。 试剂组成和配制: 试剂一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存;(自备) 试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 13mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的 试剂仍-20℃保存; 试剂三:液体 20mL×1 瓶,4℃保存; 试剂四:液体 15mL×1 瓶,4℃保存; 测定步骤: 1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 400nm,蒸馏水调零。2、加样表 试剂名称 测定管 对照管 风干土样(g) 0.02 0.02 试剂一(μL) 10 10 振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置 15min 试剂二(μL) 130 试剂三(μL) 160 160 混匀, 37℃水浴 1h 后,95℃水浴 5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却 试剂二(μL) 130 充分混匀,10000g 25℃离心 10min,取上清液(在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂) 上清液(μL) 70 70 试剂四(μL) 130 130 充分混匀,室温静置 2min 后, 400nm 处测定吸光值 A,计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每 个测定管设一个对照管。 S-α-GC 活力计算: a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0032x -0.0027;x 为标准品浓度(μmol/L),y 为吸光值。 单位的定义:每天每 g 土样中产生 1 μmol 对-XIAO基苯酚定义为一个酶活力单位。 S-α-GC 活力(μmol/d/g 土样)= (ΔA+0.0027) ÷0.0032×V 反总÷W÷T =112.5×(ΔA+0.0027) T:反应时间,1h=1/24d; V 反总:反应体系总体积:3×10-4 L;W:样本质量,0.02g。 b.用 96 孔板测定的计算公式如下标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0016x -0.0027;x 为标准品浓度(μmol/L),y 为吸光值。 单位的定义:每天每 g 土样中产生 1 μmol 对-XIAO基苯酚定义为一个酶活力单位。 S-α-GC 活力(μmol/d /g 土样)= (ΔA+0.0027) ÷0.0016×V 反总÷W÷T =225×(ΔA+0.0027) T:反应时间,1h=1/24d; V 反总:反应体系总体积:3×10-4 L;W:样本质量,0.02g。
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