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文献和实验问:有没有做辣根过氧化物标记的朋友啊,能不能把你们的步骤发给我。本人开始做,发现很多人用的浓度都不一样。答:1.1 试剂准备1) 10mg/mL HRP2) 0.06mol/L NaIO43) 0.16mol/L乙二醇4) 碳酸盐缓冲液(Na2CO3 0.7952g NaHCO3 1.4702g 溶于500mL蒸馏水中,调pH值到9.5)5) 2.5mg/mL NaBH46) 0.01mol/L磷酸盐缓冲液,pH7.41.2 操作步骤1. 10mg/mL取HRP VmL,溶液为棕黄色,加入
酶与抗体交联的方法有许多种 , 根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备 HRP 结合物,可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。 戊二醛二步法 1. 原理:戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶 - 戊二醛 - 免疫球蛋白结合物。 2. 标记步骤: (1) 称取 HRP25
一、戊二醛二步法1. 原理戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。2. 标记步骤(1)称取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中,于室温静置过夜。(2)反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱,用生理盐水洗脱。流速控制在1ml/1分钟,收集棕色流出液。如体积大于5ml,则以PEG浓缩至5ml。放置25ml小烧杯中,缓慢搅拌。(3)将待标记的抗体12.5mg用生理盐水稀释至5ml,搅拌下逐滴加入酶溶液中。(4)用1M
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