NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）测试盒 紫外分光光度法

乳酸脱氢酶活力测定

相关专题 目的要求 (1) 了解乳酸脱氢酶活性测定原理。 (2) 学习用比色法测定酶活性的方法。 实验原理 乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase简称LDH，EC.1.1.1.27, L－乳酸： NAD+氧化还原酶）广泛存在于生物细胞内，是糖代谢酵解途径的关键酶之一，可催化下列可逆反应。 LDH可溶于水或稀盐溶液。组织中LDH含量测定方法很多，其中紫外分光光度法更为简单、快速

醛糖还原酶测定

。又如测醛缩酶时，其底物醛类化合物可以和NAD+起非酶反应产生一种具有类似NADH吸收光谱的化合物，给测定带来困难。（四）分析容器的污染如冲洗不当，分析容器和管道中混杂有各种物质，可能影响酶活性，如微量重金属可使酶失活，残留的表面活性剂可能抑制酶活性。（五）沉淀形成使用光学法监测酶反应时，如有沉淀形成或组织匀浆中颗粒的下沉都会引起吸光度变化，引起测定结果误差，此情况常见于底物溶解度低而反应体系中底物浓度偏高。可见于用γ-谷氨酰对硝基苯胺为底物测GGT时。

细胞凋亡试验常用的方法（MTT法、荧光法、DNA琼脂糖凝胶电泳法与流式细胞仪检测法）

100ul/孔SDS-HCl终止反应，于37℃存放过夜。用酶标仪在A570波长下测吸光度值，按下式计算抑制率。抑制率（%）=（1-试验组平均吸光度值/阴性对照组平均吸光度值）x 100%。（二）荧光法：选用上述最佳浓度作用于肿瘤细胞，培养细胞48h后，收货细胞用PBS洗2-3次后用0.4%多聚甲醛室温下固定30min。弃去固定液，并用PBS洗2次后，用1%Triton X-100作用4min加入适量的0.5mg/L DAPI荧光染色60min，用PBS冲洗3次，取10ul滴片，干燥后于荧