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细胞磷脂酶D(Phospholipase D)总活性(水解)

荧光定量检测试剂盒
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  • 赫澎生物
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  • 2025年11月09日
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      赫澎生物

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    磷脂酶(phospholipase),是一种脂质水解酶,催化磷脂的水解,产生脂肪酸和其它亲脂产物,参与磷脂代谢。磷脂酶家属有四种类型亚酶,包括A、BCD磷脂酶Aphospholipase A;PLA)主要水解磷脂sn-1(磷脂酶A1催化)和sn-2(磷脂酶A2催化)位置上的乙酰基;磷脂酶Bphospholipase B;PLB)同时水解磷脂的sn-1sn-2位置上的乙酰基,又称为溶血磷脂酶(lysophospholipase);磷脂酶Cphospholipase C;PLC在磷酸基前水解,释放二酰基甘油(diacylglycerol;DAG和第二信使分子三磷酸肌醇inositol triphosphate);磷脂酶Dphospholipase D;PLD;EC3.1.4.4在磷酸基后水解,释放磷脂酸phosphatidic acid)。哺乳动物磷脂酶D,又称为磷脂酰胆碱磷脂酸水解酶(Phosphatidylcholine phosphatidohydrolase),有2个异构体:磷脂酶D1D2,存在于细胞质膜上,通过催化特异性磷脂酰胆碱(phosphatidylcholinePC上磷酸二酯键(phosphodiester)的水解,产生磷脂酸胆碱(choline),磷脂酸作为信号分子,进一步水解为二酰基甘油,与跨膜信号功能、囊泡运输(vesicle trafficking)、细胞骨架调节等有关。同时通过转移磷脂基团到原生醇类的羟基上的磷脂转移活性(transphosphatidylation),帮助合成磷脂酰醇胺(phosphatidyl ethanolamine;PE磷脂酰丝氨酸phosphatidylserine;PS)和磷脂酰甘油phosphatidylglycerol;PG)等可溶性脂类产物。基于底物磷脂酰胆碱,在磷脂酶D的作用下,水解产生为磷脂酸和胆碱后,通过碱氧化酶(choline oxidase)过氧化氢,然后借助过氧化酶(peroxidase)的作用,与非荧光性染料乙酰二氢氧吩恶嗪10-acetyl-3,7-dihydroxypheno xazineADHP反应高度荧光的羟基异吩恶唑酮resorufin后荧光峰值的变化激发波长530nm散发波长590nm),来定量分析磷脂酶D的水解活性。磷脂酶D连续循环反应系统为:

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