Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒

日本同仁Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit

（Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒）

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日本同仁Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit（Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒）介绍：

细胞凋亡是指为维持有机体内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。正常情况下，任何细胞在形成过程中发生的异常都会通过凋亡消除。例如，体内的癌细胞增长为肿瘤的过程会受细胞凋亡的引导而被抑制。然而，在抑癌基因p53出现问题时，凋亡就不会诱导发生，从而导致癌细胞的不断增长。
　　细胞凋亡可以通过细胞形态的变化或生物化学的变化来检测。目前常用的指标有caspase活性变化、DNA碎片、磷脂酰丝氨酸的外翻等。
　　Annexin V染色的细胞可以用于检测细胞凋亡早期的细胞膜变化。在细胞凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸由脂膜内侧翻向外侧。
　　Annexin V是一种Ca离子依赖性磷脂结合蛋白，可以与磷脂酰丝氨酸特异结合。用绿色荧光FITC标记的Annexin V通过流式细胞仪或荧光显微镜可以检测到细胞凋亡的发生。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料，PI只能透过凋亡晚期和死细胞的细胞膜，因此Annexin V和PI结合使用，可以区分凋亡早晚期的细胞及死细胞。



《所需的设备和材料》
   - 样品和诱导剂
   - PBS、去离子水
   - 合适量程的移液器
   - 细胞培养用6，12，24，96孔板
   - 流式细胞仪或荧光显微镜。
   * 最大激发/发射波长  Annexin V, FITC: 494 nm/518 nm；PI: 535 nm/617 nm
《溶液制备》
   1×Annexin V Binding solution：将10×Annexin V Binding Buffer用超纯水稀释10倍。
《稳定性》
   试剂盒在0-5℃下可以保存6个月，请避光保存Annexin V, FITC结合物。
《储存条件》
   0-5℃，避光 (切勿冻存)
《运输条件》
   室温　＊实验实例及操作步骤请参考中文说明书
 
《参考文献》
1) Casciola-Rosen L, Rosen A, Petri M, Schlissel M, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1996, 93(4)1624.
2) van Engeland M, Ramaekers FC, Schutte B, Reutelingsperger CP, Cytometry, 1996, 24(2), 131.
 






Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒关联产品
细胞凋亡检测试剂盒 
Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit (AD11)； 
细胞衰老检测试剂盒
Cellular Senescence Detection Kit-SPiDER-Gal (SG03)；
细胞增殖毒性检测试剂盒
Cell Counting Kit-8 (CK04)； 
细胞毒性检测试剂盒
Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST (CK12)； 
活死细胞双染
Calcein-AM (C326) +PI (P346)

Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒操作流程：

-悬浮细胞的操作流程
诱导凋亡的操作步骤
1.制备细胞 (Jurkat cell) 悬液 (1×106
 cells/ml)。
2.加入终浓度为1 g/ml的凋亡诱导剂 (Staurosuporine)。
3.在37℃下培养3.5 h。
* Staurosuporine用于诱导Jurkat cell凋亡。最佳诱导条件
请根据实验的细胞类型与诱导剂调整。
Annexin V染色操作步骤
1. 将细胞悬液转移到离心管中，1,000 rpm离心3 min，
 去除上清液。
2. 加入PBS，1,000 rpm离心 3 min，去除上清液。再
 重复本步操作一遍。
3. 用之前准备好的1×Annexin V Binding Solution制备
 细胞终浓度为1×106
 cells/ml的细胞悬液。
4. 取100 l步骤3中制备的细胞悬液，加入到一个新的
 tube中。
5. 向细胞悬液中加入5 l Annexin V,FITC结合物，再
 加入5 l PI Solution。
6. 室温下避光培养15 min。
7. 加入400 l 1×Annexin V Binding Solution，请在
 1 h内检测。

-贴壁细胞的操作流程
诱导凋亡的操作步骤
1. 制备细胞 (Caco-2) 悬液 (1×106
 cells/ml),
 将细胞悬液接种到培养皿或者培养板中。
2. 在5% CO2培养箱中37℃预培养。
3. 加入终浓度为25 mol/ml的凋亡诱导剂 (Cisplatin)。
4. 37℃培养4 days。
Annexin V染色操作步骤
1. 吸取培养皿或培养板中的上清液丢弃或转移至微型
 管中保存。
2. 用PBS洗细胞2次，丢弃或收集清洗液保存。
3. 用胰蛋白酶消化细胞。 
4. 用适量的培养基或PBS将细胞悬液转移至离心管中，
 如果第一步的上清液和第二步的清洗液没有丢弃，
 可以一并加入。
5. 1,000 rpm离心3 min，弃上清。
6. 加入PBS后1,000 rpm离心3 min，弃上清。重复本
 步操作一遍。
7. 加入预先配好的1×Annexin V Binding Solution，制
 成终浓度为1×106
 cells/ml的细胞悬液。
8. 取100 l步骤7中的细胞悬液，加入到新的tube中。
9. 向细胞悬液中加入5 l Annexin V, FITC结合物，再
 加入5 l的PI Solution。
10. 室温下避光培养15 min。
11. 加入400 l 1×Annexin V Binding Solution，请在
 1 h内检测。
备注：1. 上清液及清洗液中可能含有细胞或凋亡细胞，可
 以收集一起处理。
 2. 离心后如果无法判断tube中是否含有细胞？可以
保留上清液，以防检测时没有细胞，进而得不到
实验结果。