SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(非变性)(2×) 免疫检测

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(非变性)(2×) 免疫检测，我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(非变性)(2×) 免疫检测
编号：ZN1879
规格：1ml×6
品牌：百奥莱博
产地：北京
产品保存:-20℃一年有效、
产品说明：
蛋白上样缓冲液2×(非变性非还原),是一种以*酚蓝为染料的2倍浓缩液的蛋白上样缓冲液，试剂中不含有 SDS，DTT。可用于非变性的蛋白样品上样及其它分析。
使用说明：
1．按照1体积蛋白样品加入1体积蛋白上样缓冲液即1：1的比例混合，即可上样，电泳。
2．通常电泳到当*酚蓝染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。

我公司的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(非变性)(2×) 免疫检测，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
SNM264 载脂蛋白B测定试剂盒(免疫比浊法) Apolipoprotein B Assay Kit
SNM581 甘油激酶(GK)(EC2.7.1.30) Glycerol kinase
GL1792 *化铵溶液(5mol/L) 100ml
GL0684 碳酸*水溶液(0.05%) 500ml
GL1108 胃蛋白酶水溶液(0.4%) 100ml
SK192 血清铁浓度检测试剂盒 Serum iron concentration detection kit
GL2014 维生素C检测试剂盒(铜氧化微板法) 100T
GL0953 亚甲基蓝染色液 0.1%|0.2%|0.5%|1% 100ml
GL1344 pH标准缓冲溶液(pH=4.00) 50ml|100ml
GL0183 高糖DMEM(含丙*(代"酮")酸*) 500ml
SNM122 丙*(代"酮")酸激酶测定试剂盒(测组织、血清)(紫外比色法) Pyruvate kinase assay kit
GL1209 λ退火缓冲液(pH7.6) 100ml
GL1591 MES溶液(0.1mol/L) 100ml
GL0458 福尔马林-EDTA脱*液 500ml
SNM323 *测试盒(带标准)微板法 Calcium Assay Kit
SK048 过氧化物酶检测试剂盒 POD Test Kit
GL1856 尿本-周氏蛋白定性检测试剂盒(热沉淀法) 50T
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SK253 考马斯亮蓝法蛋白含量检测试剂盒 The protein content of detection kit(Coomassie brilliantblue method)
GL2084 α-岩藻糖苷酶(AFU)检测试剂盒(PNP-F终点微板法) 100T
GL1031 内源性生物素封闭液 100ml
SK134 磷脂酶D检测试剂盒 PLD Test Kit
GL0276 McIlvaine缓冲液(pH3.0-8.0) 500ml
SNM181 乳酸脱*酶同工酶试剂盒(抑制法) LDH isoenzymes assay kit
GL1277 SSC缓冲液(20×,pH7.0,RNase free) 500ml
GL1679 琥珀酸*溶液(1%) 100ml
GL0544 Rossman固定液 500ml
SNM383 考马斯亮蓝R-250 Coomassie Brilliant Blue R-250
GL1526 CAPS转移缓冲液(中分子量) 500ml
GL1921 铁检测试剂盒(亚铁嗪比色法) 50T
GL0836 鲁哥氏染色液(Lugol"s碘液,5%,无菌) 100ml|500ml
SNM584 腺苷脱*酶(ADA)(EC 3.5.4.4) Adenosine deaminase
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·Trk A mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN1432
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：human,rat,mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.Trk A mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗Digoxi*(代"n") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗Digoxi*(代"n")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
Trk的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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