Klenow片段(无外切酶活性) 工具酶

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应Klenow片段(无外切酶活性) 工具酶，产品信息：

类别：工具酶

英文名：Klenow Fragment，Exo-

产品名	产品编号	包装规格
Klenow片段(无外切酶活性)	YT510	100U

编号：YT510

规格：100U

英文名：Klenow Fragment，Exo-

品牌：百奥莱博

产地：北京

本酶是没有外切酶活性的Klenow片段，是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)缺失了外切酶活性的突变体。Klenow Fragment，Exo-保留了DNA聚合酶I的5"→3"聚合酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5"→3"和3"→5"外切酶活性。

 

特点：由于Klenow Fragment，Exo-没有外切酶活性，其在末端补平时经常会在3"末端额外加上1个或多个核苷酸，因此不能用于产生平末端而用于后续的连接。

用途：5"突出末端的标记；随机引物法进行DNA标记；Sanger双脱氧法进行DNA测序等。

来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为突变的 polA 基因片段。

分子量：约68kDa(单体)。

活性定义：37℃30分钟内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。

酶活性检测条件：67mM potassiu*(代"m") phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl2，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[3H]-dTTP，62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。

纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。

酶储存溶液：25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。

Reaction Buffer(10X)：500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl2， 10mM DTT。

失活或抑制：75℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Klenow Fragment，Exo-失活。金属离子螯合剂，无机焦磷酸盐(PPi)，大剂量的无机磷酸盐(Pi)均对Klenow Fragment，Exo-有抑制作用。

储存条件：-20℃。

 

使用说明：

 

1. 随机引物法进行DNA标记：

a. 参考如下表格设置反应体系：

DNA———————————————————————————————10µl(100ng)

Reaction Buffer (10X)——————————————————————5µl

125µM random decamer or hexamer primer——————————————10µl

补充无核酸酶的去离子水——————————————————————至40μl

混匀后沸水浴孵育5-10分钟，立即置于冰浴冷却。进行后续步骤前离心沉淀液

3 dNTP Mixture (0.25mM each , without the labeled—————————4μl

[α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol (3000Ci/mmol)————————————1.85MBq (50μCi)

Klenow Fragment，Exo-———————————————————————1µl (5U)

补充无核酸酶的去离子水———————————————————————至50µl

b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。

c. 对于random decamer primer，37℃孵育5分钟；对于random hexamer primer，37℃孵育10分钟。

d. 加入4μl 0.25mM dNTP，混匀后37℃孵育5分钟。

e. 加入1μl 0.5M EDTA，pH8.0终止反应。

f. 取1μl上述液体用于检测标记的效率。

g. 用Sephadex G-50或Bio-Gel P-60或其它适当试剂盒纯化标记好的探针。

 

2. 双链DNA 5’突出(5’ overhang)末端的标记：

a. 参考如下表格设置反应体系：

Digested DNA ——————————————————————————10~15µl(0.1~4μg)

Reaction Buffer (10X)——————————————————————2µl

[α-32P]-dNTP, ~15-30 TBq/mmol(400-800Ci/mmol) —————————0.74 MBq(20μCi)

或 [α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol(3000Ci/mmol)———————————2.96 MBq(80μCi)

3 dNTP Mixture (2.5mM each , without the labeled）————————2μl

Klenow Fragment，Exo-———————————————————————0.2μl (1U)

补充无核酸酶的去离子水———————————————————————至20µl

b. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。

c. 30℃孵育15分钟。

d. 75℃孵育10分钟终止反应。

 

3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。

Klenow片段(无外切酶活性) 工具酶专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

关键词：Klenow片段(无外切酶活性),YT510,Klenow Fragment，Exo-

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编号	类别	名称
YT673	一抗	小鼠抗GAPDH抗体
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YT236	凝胶迁移EMSA	OCT-1凝胶迁移突变探针(1.75μM)
YT252	凝胶迁移EMSA	SP1凝胶迁移突变探针(10μM)
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YT573	酶和辅酶	天冬*酸激酶
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YT756	一抗	兔抗ROCK1抗体
YT397	核酸扩增(PCR)	cDNA第一链合成试剂盒II(RNase H-)
YT241	凝胶迁移EMSA	p53凝胶迁移突变探针(1.75μM)
YT364	生化检测试剂盒	唾液酸酶检测试剂盒(神经*酸酶检测试剂盒)
YT647	一抗	Bak抗体
YT694	一抗	兔抗CD133抗体
YT887	免疫检测	YT™免疫染色一抗稀释液
YT554	酶和辅酶	单胺氧化酶
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YT732	一抗	小鼠抗Insulin抗体
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YT721	一抗	兔抗GRP78抗体
YT889	免疫检测	YT™免疫组化染色二抗稀释液

 

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