BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+U

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)(低含量ROX校正染料)北京价格在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)(低含量ROX校正染料)北京价格
编号：WE0155
规格：5ml
英*(代"文")名：BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG)(Low ROX)
品牌：百奥莱博
产地：北京
  本品是专用于探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含 BaldStar Taq DNA polymerase、PCR Buffer、dNTPs(dTTP全部被dUTP所取代)、UNG酶和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列的检测，如基因表达分析，拷贝数分析，SNP基因型分析等。本产品中运用了dUTP-UNG防污染系统，在PCR反应体系配制过程中加入了dUTP，因此就形成了含有dU碱基的扩增产物。而此产物可以在下次进行PCR反应前，由PCR体系中的UNG酶处理消除。这样就有效的去除了PCR产物的残留污染，大大降低了由于扩增产物污染而导致的假阳性。UNG酶在PCR循环中的预变性步骤即可被灭活，因此不会影响新的含dU碱基PCR产物的形成。本品含有的 BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的 PCR缓冲体系与热启动酶的组合，显著提高了PCR的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，可以检测单拷贝的模板。使用本产品可以得到更广的线性范围，对目的基因定量更准确。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0154)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0155)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0156)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

产品组成：

 

组份	WE0154-5ml	WE0155-5ml	WE0156-5ml
2×BaldStar TaqMan Mixture(UNG)	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。


使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaldStar TaqMan Mixture(UNG)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Probe，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。

2、PCR反应程序
注意！本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！

两步法PCR：

步骤	温度	时间	循环数
UNG酶消化	37℃/50℃	2-10 min
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火/延伸	60℃	1 min

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增。

三步法PCR：

步骤	温度	时间	循环数
UNG酶消化	37℃/50℃	2-10 min
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火	55℃-65℃	30s
延伸	72℃	30s

储存条件：-20℃，避免反复冻融

关于BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)(低含量ROX校正染料)北京价格的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·TBS(pH8.0,10×)
编号：WE0313
规格：500ml

·琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒
编号：WE0168
英*(代"文")名称：Gel DNA Extraction Kit
规格：50次|200次
  本试剂盒采用新型硅基质膜技术和试剂配方，通过独特的离心吸附柱快速的结合DNA-洗涤-洗脱步骤即可从普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化100bp-10 kb的DNA片段，溶胶速度快，每个吸附柱最高可吸附10μg的DNA，同时有效去除引物、核苷酸、酶、矿物油、琼脂糖等杂质。纯化回收的DNA纯度及浓度高，完整性好，回收率高，可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。

试剂盒组成：

组份	50次	200次
Buffer PG	25ml	100ml
Buffer PS	15ml	60ml
Buffer PW(浓缩)	10ml	50ml
Buffer EB	10ml	30ml
离心吸附柱DM及收集管	50套	200套

产品特点：
1、快速简单：操作步骤少，简单三步即可获得即用型DNA。
2、回收率高：新型硅基质膜技术和试剂配方保证每次最大量回收到纯度极高的目的DNA。
3、处理量大：每个离心吸附柱每次最多可吸附的DNA量为10μg。

自备试剂：无水乙醇，异丙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
2、使用前请检查Buffer PG，如果出现结晶或者沉淀，可在37℃水浴中放置3-5分钟，即可恢复澄清。
3、电泳时最好使用新的电泳缓冲液，避免影响电泳和回收效果；如下一步实验要求较高，请尽量使用TAE电泳缓冲液。
4、切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
5、回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少，洗脱体积越少，回收率越低。
6、将水浴锅预热至50℃。
7、Buffer PG中含有pH指示剂，当pH≤7.5时溶液的颜色为黄色，此时DNA才能够有效的与膜结合，当pH值偏高时溶液的颜色变为桔红色和紫色，需要进行调整。
8、所有离心步骤均可室温下进行。

操作步骤：
1、将单一目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)，放入干净的离心管(自备)中，称量计算凝胶重量(提前记录离心管重量)。
注意：若胶块的体积过大，可将胶块切成碎块。
2、向胶块中加入1倍体积Buffer PG(如凝胶重为100 mg，其体积可视为100μl，依此类推)。
3、50℃水浴温育，其间每隔2-3分钟温和地上下颠倒离心管，待溶胶液为黄色，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟直至胶块完全溶解。
注意：
1)凝胶完全融解后胶溶液为黄色，可进行后续操作；若胶溶液为桔红色或紫色，可向胶溶液中加10-30μl 的3 M醋酸*(pH 5.0)，将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作。
2)胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱，吸附柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。
4、(可选步骤)当回收片段<300 bp时，应加入1/2胶体积的异丙醇，上下颠倒 混匀(如凝胶重100 mg，则加入50μl的异丙醇)。
5、柱平衡：向已装入收集管中的吸附柱DM中加入200μl Buffer PS，13000rpm(~～～16200×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、将步骤3或4所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：吸附柱容积为750μl，若样品体积大于750μl 可分批加入。
7、向吸附柱中加入450μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如果纯化的DNA用于盐敏感的实验(例如平末端连接或直接测序)，建议加入Buffer PW静置2-5分钟再离心。
8、重复步骤7。
9、13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱放到一个新的1.5ml离心管(自备)中，向吸附膜中间位置悬空滴加50μl Buffer EB，室温放置2分钟。13000rpm离心1分钟，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意：
1)为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟。
2)洗脱体积不应小于30μl，体积过少会影响回收效率。
3)回收大于10 kb的DNA片段时，Buffer EB应在50℃水浴中预热，可增加回收效率。


备注：本试剂盒也适用于PCR产物的纯化回收。在PCR反应液中加入等体积的BufferPG，充分混匀(对于回收小于150bp的小片段可将溶液的体积增加到3倍以提高回收率)接上述步骤5进行后续操作。

储存条件：室温(15～30℃)。


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KFS228 P53蛋白检测试剂盒 P53 Detection Assay(Western Blot)
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BTN131197 96孔板病毒DNA提取试剂盒(真空法) Virus DNA extraction kit(96-well plates)(Vacuum method)
WE0283 Tris-甘*酸蛋白电泳液(pH8.3, 10×) Tris-Glycine SDS Buffer(pH8.3, 10×)
SV0821 凝胶上样染料，橙色 （6X）
ALH286 10mM dNTP混合溶液 10mM dNTPs Solution
BTN100839 潮霉素B Hygromycin B Powder
YT295 GSSG和GSH检测试剂盒 GSH and GSSG Assay Kit
SY0210 C-REL-GFP报告基因质粒 C-REL GFP Reporter Plasmid
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BTN3160 RNase A溶液(10mg/mL) RNase A Solution(10mg/mL)
SY0007 核糖核酸酶A(来源于牛胰腺) Ribonuclease A (RNase A) from bovine pancreas 
SY0575 7-AAD细胞活力染色液 7-AAD Viability Staining Solution
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SV0143 BmtI限制性内切酶 BmtI Restriction Endonuclease
SY0359 SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 SDS-PAGE Gel Preparation Kit
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SV1021 9°N DNA 连接酶
HR0109 酵母膜蛋白提取试剂盒 Yeast membrane protein extraction kit
BTN130530 His标签蛋白专用蛋白酶抑制剂 Protease Inhibitor for His-tagged Protein
YT402 核酸酶/RNA/DNA清除剂(喷雾清除剂) RNase, DNase, RNA and DNA Away
ALH071 血液miRNA提取试剂盒 Blood microRNA Extraction Kit
KFS086 4-20%预制胶(205-6.5 kDa分离范围;12个样/胶)
BTN160697 1×TBS(含5%BSA，0.1%Tween20溶液)
SY0111 AAT-promoter-Luc荧光素酶报告基因质粒 AAT-promoter luciferase reporter plasmid
HR0387 His标签蛋白纯化填料(带柱子) His tag protein purification packing (with column)
WE0140 实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ) BaReSYBR Mixture
SV0426 HphI限制性内切酶 HphI Restriction Endonuclease
SY0473 细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-Alexa Fluor 647/PI) Annexin V-Alexa Fluor 647/PI Apoptosis Detection Kit
BTN70905 2%明胶溶液(PCR级) Gelatin Solution，PCR Grade
YT148 线粒体膜电位检测试剂盒 Mitochondrial membrane potential assay kit with JC-1

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