SDS-PAGE分离胶缓冲液(4×)厂家

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SDS-PAGE分离胶缓冲液(4×)厂家是高品质的蛋白质研究产品，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多SDS-PAGE分离胶缓冲液(4×)等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：SDS-PAGE分离胶缓冲液(4×)厂家
编号：WE0287
规格：500ml
英文名：SDS-PAGE Separating Gel Buffer(4×)
品牌：百奥莱博
产地：北京
  本产品为配制SDS-PAGE分离胶缓冲液，可用于配制各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶，方便、快捷。产品中已加入10%SDS,使用时不用另外加入。

操作步骤：
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1。

I 灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表2)
1、参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Separating Gel Buffer(4×)分离胶缓冲液和纯水在小烧杯或试管中混合。
3、加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可)， 然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
5、静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

II 灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表3)
1、去除覆盖在分离胶上的水层。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
3、加入10%过硫*(代"酸")铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
6、静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。

附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围

 

SDS-PAGE 分离胶浓度	最佳分离范围
6%胶	50-150 kD
8%胶	30-90 kD
10%胶	20-80 kD
12%胶	12-60 kD
15%胶	10-40 kD

附表2. 配制SDS-PAGE分离胶

分离胶浓度	凝胶体积	所需各组分体积(单位：ml)
		纯水	30%Acr-Bis(29:1)	分离胶缓冲液(4×)	10%APS	TEMED
6%	5ml	2.75	1.0	1.25	0.05	0.004
	10ml	5.5	2.0	2.5	0.1	0.008
	15ml	8.25	3.0	3.75	0.15	0.012
	20ml	11	4.0	5	0.2	0.016
8%	5ml	2.42	1.33	1.25	0.05	0.003
	10ml	4.8	2.7	2.5	0.1	0.006
	15ml	7.25	4.0	3.75	0.15	0.009
	20ml	9.7	5.3	5	0.2	0.012
10%	5ml	2.08	1.67	1.25	0.05	0.002
	10ml	4.17	3.33	2.5	0.1	0.004
	15ml	6.25	5.0	3.75	0.15	0.006
	20ml	8.3	6.7	5	0.2	0.008
12%	5ml	1.75	2.0	1.25	0.05	0.002
	10ml	3.5	4.0	2.5	0.1	0.004
	15ml	5.25	6.0	3.75	0.15	0.006
	20ml	7.0	8.0	5	0.2	0.008
15%	5ml	1.25	2.5	1.25	0.05	0.002
	10ml	2.5	5.0	2.5	0.1	0.004
	15ml	3.75	7.5	3.75	0.15	0.006
	20ml	5	10.0	5	0.2	0.008

附表3. 配制5%SDS-PAGE浓缩胶

凝胶体积	所需各组分体积(单位：ml)
	纯水	30%Acr-Bis(29:1)	浓缩胶缓冲液(4×)	10%APS	TEMED
2ml	1.14	0.34	0.5	0.02	0.002
4ml	2.28	0.68	1	0.04	0.004
6ml	3.42	1.02	1.5	0.06	0.006
8ml	4.56	1.36	2	0.08	0.008

储存条件：2～8℃

我公司的SDS-PAGE分离胶缓冲液(4×)厂家，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
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SY0151 慢病毒报告基因阴性对照 Lentivirus Luciferase Reporter negative control
BTN90313 10×TBE电泳液
BTN100103B 裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒 S.pombe Chemical Competent Cell Preparation Kit
ALH116 大量全血基因组DNA提取试剂盒(10ml) Whole blood genomic DNA extraction kit
YT451 NF-κB荧光素酶报告基因质粒 NFκB-luc Reporter gene plasmid
WE0225 RNase A溶液(100mg/ml) RNase A(100mg/ml)
BTN130812 凋亡DNA提取试剂盒 Apoptotic DNA extraction kit
SV1110 8-氧代鸟嘌呤 DNA 糖基化酶 Fpg 8- oxygen generation guanine DNA glycosylation enzyme Fpg
YT088 免疫染色一抗稀释液 Immunol Staining Primary Antibody Dilution Buffer
KFS170 Fluo-4, AM(Ca2+ GPCR分析-*离子指示探针) Fluo-4, AM
SY0407 12ml重力层析空柱 Gravity Chromatography Columns
SV0242 BssSαI限制性内切酶 BssSαI Restriction Endonuclease
KFS369 胃蛋白酶测试盒
"
SY0047 dNTP混合溶液(10 mM each) dNTP Mix (10 mM each)
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BTN130918 dITP溶液(2.5mM) dITP Solution(2.5mM)
SV1596 HeLa 基因组 DNA
YT336 蛋白转运抑制剂(Monensin) Protein Transport Inhibitor
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·高纯质粒大提试剂盒
编号：WE0164
英文名称：PlaPure Maxi Extraction Kit
规格：10次
  本试剂盒提供一种简单、快捷、高效的提取质粒的方法，在碱裂解法裂解细胞的基础上，采用独特的硅基质膜吸附技术和试剂配方，通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的质粒DNA，经过两步洗涤，一步洗脱，最大限度的去除蛋白质、基因组、RNA和其他杂质。得到的DNA可直接用于PCR、酶切、测序、连接等生物学实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer P1	125ml
Buffer P2	125ml
Buffer P3	125ml
Buffer PB	30ml
Buffer PW(浓缩液)	50ml
Buffer EB	30ml
RNase A(10 mg/ml)	2ml
吸附柱DQ及收集管	10套
离心管(50ml)	10个

自备试剂：无水乙醇，异丙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，更长时间保存可置于2～8℃，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可稳定保存6个月。
2、第一次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1 中，混匀，置于2–8℃保存，使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请先检查Buffer P2 、Buffer P3、Buffer PB是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清(请勿剧烈晃动Buffer P2)。
5、注意不要直接接触Buffer P2 和Buffer P3，使用后应立即盖紧盖子。
6、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
7、所有离心步骤均可在室温下进行。

操作步骤：
1、取150ml过夜培养的菌液加入离心管(自备)中，12000×g离心3分钟收集细菌，尽量吸弃全部上清。
注意：质粒拷贝数较低或>10 kb时，可以使用更多菌液通过二次离心将菌体沉淀收集到同一个离心管中，同时后续所加试剂Buffer P1、P2及P3的量需按比例加倍。所加试剂的量必须能够充分裂解菌体，菌体过多、裂解不充分都会降低质粒的提取效率。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入12ml Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮细菌沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，使提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入12ml Buffer P2，温和地上下颠倒混匀6-8次，充分混匀使菌体裂解，室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。并且此步骤所用时间应不超过5分钟，避免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入12ml Buffer P3，立即上下颠倒混匀6-8次，充分混匀，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5分钟。12000×g离心10分钟。
注意：Buffer P3 加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
5、取上清加入新的离心管(自备)中，向上清中加入11ml异丙醇，上下颠倒混匀。
6、将步骤5中的混合溶液转移到已装入收集管的吸附柱DQ中。12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：吸附柱的最大容积为15ml，所以第5步中所得溶液分多次过柱。如果离心机转子倾角较大时，建议加入吸附柱的溶液体积不超过10ml，以防发生漏液现象。
7、向吸附柱中加入2.5ml Buffer PB，12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入10ml Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液。
9、重复步骤8。
10、将吸附柱重新放回收集管中，12000×g离心5分钟，倒掉废液，将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
11、将吸附柱置于一个新的收集管中，向吸附膜的中间部位加入1-3ml Buffer EB，室温放置2-5分钟，12000×g离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意：
1)为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5分钟，12000×g离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。
2)洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5范围内(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
3)质粒拷贝数较低或>10 kb时，Buffer EB在65-70℃水浴预热，适当延长吸附和洗脱的时间，可以增加提取效率。

储存条件：室温(15～30℃)


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SY0295 pUM19-T Vector TA克隆载体
RFT189 5×RNA上样液 5×RNA loading buffer
KFS268 Ac-VEID-FMK(caspase 6 抑制剂 ) Caspase 6 Inhibitor Z-VE(OMe)ID(OMe)-FMK
HR0071 藻类蛋白提取试剂盒 Algal protein extraction kit
YT884 染色质免疫沉淀检测试剂盒(ChIP检测试剂盒) Chromatin Immunoprecipitation(ChIP)Assay Kit
BTN131182 Sulfolobus DNA聚合酶IV Sulfolobus DNA Polymerase IV
HR0454 EB染色试剂盒 EB Staining Kit
SV1436 PURExpress 二硫键增强剂
YT231 NF-κB凝胶迁移突变探针(1.75μM) NF-κB Mutation Probe For EMSA(1.75μM)
BTN130204 Oligo快速复性液 Oligo Rapid Renaturing Solution
SY0555 CM-DiI活细胞染色剂
SV0653 SacII限制性内切酶 SacII Restriction Endonuclease
WE0219 IPTG溶液(50mg/ml) IPTG Solution(50mg/ml)
BTN130933 FTA卡血液样品DNA提取试剂盒 FTA blood sample DNA extraction kit
SY0191 Pax6-GFP报告基因质粒 Pax6 GFP Reporter Plasmid
RFT151 高分子量非变性电泳蛋白质Marker(66～669 kD) High Molecμlar Weight Native Electrophoresis Protein Marker
KFS165 Ca2+ GPCR分析-*离子指示探针 Fluo-2, AM Fluo-2, AM
SY0402 MBP标签蛋白纯化预装柱，1ML Dextrin 6FF Chromatography Column, 1ML

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