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BTN120308型植物叶绿体纯化试剂盒厂家价格

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  • ¥200 - 2340
  • 百奥莱博
  • BTN120308-WLD
  • 北京
  • 2025年07月14日
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    • 英文名

      Plant Chloroplast Purification Kit

    • 保质期

      一年

    • 供应商

      北京百奥莱博科技有限公司

    • 保存条件

      常温运输,4℃保存,保存期限一年。使用方法:注意:叶绿体对温度高度敏感,所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行,所用器皿和溶液均需要在4℃预冷。离心时一定要在4℃进行,离心力以g而不是rpm计算。如果需要研究叶绿体的功能,提取过程还需要在昏暗的光线条件下进行。1.实验前1-2天将植物放在暗室培养以减少叶绿体中淀粉颗粒的形成,否则离心时这些颗粒很容易使叶绿体破裂。叶片在实验前需先用自来水洗净,再用蒸馏水淋洗,去掉多余水分。如果叶片采集后不能立即处理,则保存时需要保持叶片湿润,即使如此,叶片的放置时间也不能超过一天。2.新鲜(实验当天)制备溶液A:将自备的去离子水与溶液A成分一按4:1的比例混合,然后在混合液中加入溶液A成分二干粉到终浓度0.1%(每100mL中加入0.1g干粉),摇晃溶解后所得溶液即为溶液A,冰上预冷待用。一次实验(从30 g叶片提取叶绿体)所需要的溶液A体积跟材料不同而不同。3.新鲜采集植物叶片,快速去除叶脉并将叶片剪成1-3cm2大小的碎片并浸泡在适量的预冷的溶液A中(每克叶片加4mL溶液A,但对烟草和大豆,每克叶片需要加6mL溶液A)。4.将浸泡了叶片的溶液A转移到Waring匀浆机(即家用制备果汁的匀浆机)中,低速匀浆10秒,避免起泡沫。用玻璃棒把液面的碎片按入匀浆机底部后,再低速匀浆10秒。注意:除Waring匀浆机外,还可以选择Dounce玻璃匀浆器,Polytron匀浆机和研磨(加玻璃珠)等裂解细胞的方法,但这些方法的单次处理量都比较小,需要将样品分成很多小份单独匀浆,然后再汇集。5.用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液,可先将滤液收集到预冷的200mL量筒中,再等分到4个预冷的50mL的塑料离心管中(每个管中的滤液不要超过35mL)。带柄尼龙滤膜后可反复使用。6.在水平转子离心机上4℃ 200g离心3分钟(对菠菜,白菜和莴笋材料)或400g离心1分钟(对甜菜材料),白色沉淀为未破裂的细胞或细胞核。7.将上清液(含叶绿体)转移到一个新的、预冷的50mL塑料离心管中。8.在水平转子离心机上4℃ 1000g离心7分钟,小心弃上清,沉淀含叶绿体,呈浅绿色。9.在沉淀中加入1.5mL预冷的溶液A,手弹离心管底部使叶绿体重悬。注意:重悬时最好避免溶液起泡,也不要用枪头吹打,否则叶绿体容易破裂。沉淀下有白色淀粉属于正常现象,但重悬叶绿体时避免将白色淀粉重悬。10.将4管叶绿体重悬液汇集(共约6mL)。此溶液为叶绿体粗提产物,可直接用于后续的SDS-PAGE,Western,ELISA和蛋白组分析。如果需要以之为材料精提叶绿体,就需要将破裂的叶绿体和完整的叶绿体分开,根据植物的不同,可选用下述两种密度梯度离心法之一进行分离。11.单浓度分离法(适合菠菜,白菜和莴笋等材料):a)在50mL塑料离心管中先加入6mL溶液A成分一和4mL溶液B,充分混合均匀。b)在其液面上小心铺上第11步汇集得到的约6mL叶绿体重悬液。c)在水平转子离心机上4℃ 1000g离心8分钟,最上层的绿色带含破碎的叶绿体,线粒体和核糖体等,管底的绿色沉淀为完整的叶绿体。d)小心将上清倒出后,在叶绿体沉淀中加入预冷的0.5mL溶液A成分一,手指轻弹管底使之重悬。e)将叶绿体重悬液转移到1.5mL离心管中并避光保存。可在相差显微镜下检查叶绿体完整性。叶绿体必须尽快使用,否则非常容易失去活性。12.双浓度分离法(适合烟草,甜菜和大豆等材料):a)在14mL塑料离心管中先加入0.5mL溶液A和2mL溶液B,充分混合均匀,得密度梯度重液。b)在另一试管中将3mL溶液A和2mL溶液B充分混合均匀,得密度梯度轻液。c)将密度梯度轻液小心铺在密度梯度重液之上,然后将第10步汇集得到的叶绿体重悬液中的4mL(还剩下2mL)小心铺在密度梯度轻液之上。d)在水平转子离心机上4℃ 3200g离心15分钟,最上层绿色带含破碎的叶绿体、线粒体和核糖体等,重液和轻液间的绿色带为完整叶绿体。e)用广口吸管小心将重液和轻液之间的绿色带(叶绿体)转移到新的离心管中,加入三倍体积的预冷的溶液A成分一,轻柔混匀。f)在水平转子离心机上4℃

    特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

    百奥莱博专业生产销*(代"售")BTN120308型植物叶绿体纯化试剂盒厂家价格,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。


    名称:BTN120308型植物叶绿体纯化试剂盒厂家价格
    编号:BTN120308
    规格:15次
    英文名:Plant Chloroplast Purification Kit
    品牌:百奥莱博
    产地:北京
    叶绿体是重要的,负责植物光合作用的细胞器,很多重要的特性(如雄性不育)也跟叶绿体相关,所以叶绿体是研究植物生理和母系遗传的重要材料。对植物叶绿体进行生化,遗传和分子生物学研究都需要进行叶绿体纯化。本产品就是基于密度梯度离心的,专门用于从植物叶片中纯化完整叶绿体的试剂盒。

    产品特点:
    1.即用型试剂盒,用户不需要单独配制各种溶液。
    2.提供AB两种选择,A型用于叶绿体粗提,所得叶绿体含少量其他细胞器污染,可用于后续的SDS-PAGE,Western,ELSIA和蛋白组分析。B型用于叶绿体精提,所得叶绿体完整,可用于后续的光合作用,电子链和磷酸化,跨膜转运,体外叶绿体蛋白合成,蛋白定位等研究。还可用于的叶绿体膜,基质,类囊体,叶绿体DNA和叶绿体RNA纯化。
    3.本产品足够15次提取,每次可处理30g叶片,能得到5mg左右叶绿体。
    4.已经成功用于菠菜,大豆,莴笋,白菜,烟草和甜菜等植物,还可用于更多植物(可能需要优化条件)。


    试剂盒组成:

     
    成分 规格
    溶液A成分一 250ml×2
    溶液A成分二(干粉) 3g
    溶液B 60ml
    带柄尼龙滤膜 1个
    说明书 1份


    储存条件:常温运输,4℃保存,保存期限一年。

    使用方法:
    注意:叶绿体对温度高度敏感,所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行,所用器皿和溶液均需要在4℃预冷。离心时一定要在4℃进行,离心力以g而不是rpm计算。如果需要研究叶绿体的功能,提取过程还需要在昏暗的光线条件下进行。

    1.实验前1-2天将植物放在暗室培养以减少叶绿体中淀粉颗粒的形成,否则离心时这些颗粒很容易使叶绿体破裂。叶片在实验前需先用自来水洗净,再用蒸馏水淋洗,去掉多余水分。如果叶片采集后不能立即处理,则保存时需要保持叶片湿润,即使如此,叶片的放置时间也不能超过一天。
    2.新鲜(实验当天)制备溶液A:将自备的去离子水与溶液A成分一按4:1的比例混合,然后在混合液中加入溶液A成分二干粉到终浓度0.1%(每100mL中加入0.1g干粉),摇晃溶解后所得溶液即为溶液A,冰上预冷待用。一次实验(从30 g叶片提取叶绿体)所需要的溶液A体积跟材料不同而不同。
    3.新鲜采集植物叶片,快速去除叶脉并将叶片剪成1-3cm2大小的碎片并浸泡在适量的预冷的溶液A中(每克叶片加4mL溶液A,但对烟草和大豆,每克叶片需要加6mL溶液A)。
    4.将浸泡了叶片的溶液A转移到Waring匀浆机(即家用制备果汁的匀浆机)中,低速匀浆10秒,避免起泡沫。用玻璃棒把液面的碎片按入匀浆机底部后,再低速匀浆10秒。注意:除Waring匀浆机外,还可以选择Dounce玻璃匀浆器,Polytron匀浆机和研磨(加玻璃珠)等裂解细胞的方法,但这些方法的单次处理量都比较小,需要将样品分成很多小份单独匀浆,然后再汇集。
    5.用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液,可先将滤液收集到预冷的200mL量筒中,再等分到4个预冷的50mL的塑料离心管中(每个管中的滤液不要超过35mL)。带柄尼龙滤膜后可反复使用。
    6.在水平转子离心机上4℃ 200g离心3分钟(对菠菜,白菜和莴笋材料)或400g离心1分钟(对甜菜材料),白色沉淀为未破裂的细胞或细胞核。
    7.将上清液(含叶绿体)转移到一个新的、预冷的50mL塑料离心管中。
    8.在水平转子离心机上4℃ 1000g离心7分钟,小心弃上清,沉淀含叶绿体,呈浅绿色。
    9.在沉淀中加入1.5mL预冷的溶液A,手弹离心管底部使叶绿体重悬。注意:重悬时最好避免溶液起泡,也不要用枪头吹打,否则叶绿体容易破裂。沉淀下有白色淀粉属于正常现象,但重悬叶绿体时避免将白色淀粉重悬。
    10.将4管叶绿体重悬液汇集(共约6mL)。此溶液为叶绿体粗提产物,可直接用于后续的SDS-PAGE,Western,ELISA和蛋白组分析。如果需要以之为材料精提叶绿体,就需要将破裂的叶绿体和完整的叶绿体分开,根据植物的不同,可选用下述两种密度梯度离心法之一进行分离。
    11.单浓度分离法(适合菠菜,白菜和莴笋等材料):
    a)在50mL塑料离心管中先加入6mL溶液A成分一和4mL溶液B,充分混合均匀。
    b)在其液面上小心铺上第11步汇集得到的约6mL叶绿体重悬液。
    c)在水平转子离心机上4℃ 1000g离心8分钟,最上层的绿色带含破碎的叶绿体,线粒体和核糖体等,管底的绿色沉淀为完整的叶绿体。
    d)小心将上清倒出后,在叶绿体沉淀中加入预冷的0.5mL溶液A成分一,手指轻弹管底使之重悬。
    e)将叶绿体重悬液转移到1.5mL离心管中并避光保存。可在相差显微镜下检查叶绿体完整性。叶绿体必须尽快使用,否则非常容易失去活性。
    12.双浓度分离法(适合烟草,甜菜和大豆等材料):
    a)在14mL塑料离心管中先加入0.5mL溶液A和2mL溶液B,充分混合均匀,得密度梯度重液。
    b)在另一试管中将3mL溶液A和2mL溶液B充分混合均匀,得密度梯度轻液。
    c)将密度梯度轻液小心铺在密度梯度重液之上,然后将第10步汇集得到的叶绿体重悬液中的4mL(还剩下2mL)小心铺在密度梯度轻液之上。
    d)在水平转子离心机上4℃ 3200g离心15分钟,最上层绿色带含破碎的叶绿体、线粒体和核糖体等,重液和轻液间的绿色带为完整叶绿体。
    e)用广口吸管小心将重液和轻液之间的绿色带(叶绿体)转移到新的离心管中,加入三倍体积的预冷的溶液A成分一,轻柔混匀。
    f)在水平转子离心机上4℃ 1700g离心1分钟,小心将上清倒出后,在绿色的叶绿体沉淀中加入预冷的0.5mL溶液A成分一,手指轻弹管底使之叶绿体重悬。
    g)将叶绿体重悬液转移到1.5mL离心管中并避光保存,也可在相差显微镜下检查叶绿体完整性。叶绿体必须尽快使用,否则非常容易失去活性。所得精提叶绿体可用于后续的光合作用,电子链和磷酸化,跨膜转运,体外叶绿体蛋白合成,蛋白定位等研究。还可用于的叶绿体膜,基质,类囊体,叶绿体DNA和叶绿体RNA纯化。
    BTN120308型植物叶绿体纯化试剂盒厂家价格
    我公司的BTN120308型植物叶绿体纯化试剂盒厂家价格,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
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    ·一步式胞浆蛋白微量制备试剂盒
    编号:BTN91203
    英文名称:One-Step Cytoplasmic Protein Miniprep Kit
    规格:30次
    本产品是专门用于小量真核培养细胞中制备胞浆蛋白.细胞质是真核细胞活动的重要场所,很多与新陈代谢和信号传递的蛋白质都存在于细胞质中,这些蛋白就叫胞浆蛋白。

    产品特点:
    1.一步式操作,整个提取制备过程简便,只需要半小时。
    2. 实验重复性好,尤其适合同时处理多个样品。
    3.可用于培养的动物细胞,也可以用于新鲜动物组织细胞。
    4. 温和裂解法,制备的胞浆蛋白能保持天然活性,可以直接用于活性检测、蛋白浓度测定、各种蛋白质电泳等后续研究。

    储存条件:低温运输,4℃保存、有效期一年。

    使用方法:
    将培养到55%-65%覆盖率的体外培养的真核细胞用胰酶法处理后转移到离心管中,离心30秒,在细胞沉淀中加入0.5mL溶液A,悬浮后冰浴10分钟,振荡10分钟,混匀后室温离心10秒,上清即为细胞浆提取物,可以直接放-70℃保存或直接使用。


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    ·5M异硫*酸胍溶液
    编号:BTN100902
    规格:250mL

    ·即用型荧光定量RT-PCR试剂盒
    编号:BTN101219
    英文名称:Instant Realtime RT-PCR Kit
    规格:50次
    本产品是基于荧光染料检测的即用型双酶一管式RT-PCR试剂盒,可以对靶片段进行实时定量RT-PCR分析(quantitative RT-PCR、qRT-PCR)。产品含有经过优化的缓冲液组分、MMLV-Taq DNA聚合酶混合物、dNTPs、MgCl2及新型荧光染料DNAgreen等所有一管式实时定量RT-PCR所需要的成分,用户只需加入RNA模板和引物即可进行实时定量RT-PCR反应,具有广泛的用途。

    产品特点:
    1.一管式完成qRT-PCR反应,避免样品交叉污染,尤其适合临床应用。
    2. 即开即用,用户不需要单独准备qRT-PCR所需的各种试剂。
    3. 主要成分只有两个(RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix),将加样步骤减少到最低,极大降低了加样误差,增加了可重复性。
    4. 使用范围广,适用于从病毒RNA到人RNA的各种RNA模板。
    5.高灵敏度,每个RT-PCR体系最低可以检测200拷贝的RNA分子,可扩增的模版RNA的最长达2000nt。

    试剂盒组成:
    成分 规格
    双酶一管式qRT-PCR Buffer,2× 750μl
    MMLV-Taq Mix 100μl
    RNase-free水 1ml
    说明书 1份


    储存条件:低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。

    使用方法:
    1.在一干净的无RNase的PCR管中,先加入下列成分(下面只列出样品管的设置情况,用户可自己根据需要设置阳性和阴性对照):
    成分 样品
    自备RNA模板(分下面三种情况) 见下
    总RNA 100-500ng
    或poly(A)mRNA 10-500ng
    或体外转录得到的专一RNA 0.01pg-500ng
    RNA特异性引物一(自备) 终浓度300nM(注1)
    RNA特异性引物二(自备) 终浓度300nM
    RNase-free水 补到10μL
    双酶一管式qRT-PCR Buffer(2×) 15μl
    自备ROX(某些荧光PCR机型需要) 3μL(注2)
    MMLV-Taq Mix 2μl

     注1:通常初次使用本试剂时,可用引物浓度300nM进行实验,根据实验结果具体情况,在200~800nM范围内调整引物浓度。引物、待检样品的具体加量用户可以根据实际情况调整,同时增减RNase-free水用量,保证总反应体积不变即可。
     注2:如果使用ABI公司的7500,7700和7900三种型号的荧光PCR仪器,则需用自备的ROX进行Ct值校正。对ABI 7700和7900,ROX的最佳浓度为1×(即在每30μl反应体系中加3μl 10×ROX)。对ABI 7500,ROX的最佳浓度为0.05-0.1×(每30μL反应体系加0.3μL 10×ROX;也可将10×ROX稀释到1×,然后每个反应体系加入3μL 1×ROX)。ROX会在溶解曲线中产生噪音,因此,如果出现了杂峰,将软件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”选项取消打勾,然后重新分析数据。对于iCycler IQ,MJ Opticon,MJ Chromo4,MX3000,MX4000,RotorGene3000,RotorGene 6000和LightCycler 480等型号的荧光PCR仪器,ROX不是必须的,但加入的话也不会影响整个PCR分析。
    2. 轻柔混合均匀后放入PCR仪中进行荧光定量RT-PCR。
    3. 设定RT-PCR反应条件时,一般将RT的条件设定成42℃ 30分钟,后接94℃变性5分钟,然后进入PCR循环(PCR参数将根据自备引物的Tm值和PCR产物长度由用户自行决定注)、最后72℃ 5分钟。并在退火或延长步骤中记录荧光信号。本产品中所含的荧光染料在没结合DNA时,最大吸收光谱在471nm,结合DNA时的最大吸收光谱在500nm,最大发射光谱在530nm。



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