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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
575
- 英文名:
One-step plasmid DNA extraction kit 2.0
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温运输及保存(溶液A需要4℃保存),有效期一年。使用方法:1. 用塑料离心管收集不超过3mL 过夜培养饱和菌液,室温12000~15000g离心半分钟,弃上清。注意:不能超过3mL菌液,否则质粒回收率将急剧降低。2. 加入0.6-1mL溶液A(用前需摇匀),充分吹打或振荡裂解细菌直到裂解变澄清,一般需要半分钟左右。注:此方法不同于碱裂解法,故可以充分吹打。3. 将裂解液全部转移到离心吸附柱中,室温静置2分钟使质粒DNA与膜结合。室温12000~15000g离心半分钟,弃穿透液。如果一次不能将上清全部转移到离心吸附柱中,可以分两次进行。4.在离心吸附柱中加入0.7mL的通用预洗液,室温12000~15000g离心半分钟,弃穿透液。注意: 如果通用预洗液放置在低温产生了沉淀,用前需要加热到60℃左右使之融化,混匀后再用。5. 再在离心吸附柱中加入0.3mL的通用预洗液,室温12000~15000g离心半分钟,弃穿透液。此步预洗最好别省略,否则DNA 纯度不高。6.在离心吸附柱中加入0.7mL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心半分钟,弃穿透液。7. 再在离心吸附柱中加入0.7mL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心半分钟,弃穿透液。此为第二次洗涤。8. 再在离心吸附柱中加入0.4mL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心半分钟,弃穿透液。此为第三次洗涤,如果不洗涤三次,最后得到的质粒DNA的OD260和280的比值达不到1.8。9.室温 12000~15000g离心半分钟,甩干残留液体。注意:此步不能省略,否则残留乙醇会影响后续的电泳上样(DNA 沉不到加样孔里去)和酶反应。10. 将离心柱置于一个新的1.5mL自备塑料离心管中,加入30-100μl DNA 洗脱液2.0,室温放置2分钟。如果将DNA 洗脱液2.0预热到65-80℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应北京现货一步法质粒DNA提取试剂盒2.0厂家,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应北京现货一步法质粒DNA提取试剂盒2.0厂家,产品信息:
类别:DNA纯化
英文名:One-step plasmid DNA extraction kit 2.0
| 产品名 | 产品编号 | 包装规格 |
| 一步法质粒DNA提取试剂盒2.0 | BTN70903 | 50次 |
编号:BTN70903
规格:50次
英文名:One-step plasmid DNA extraction kit 2.0
品牌:百奥莱博
产地:北京
基于碱变性原理的质粒小量制备(Miniprep)是分子克隆研究中最常用的方法之一,其操作包括三种溶液处理,一般需要30分钟左右的时间才能得到可以上柱的质粒DNA初提液。本产品采用百奥莱博自主开发的一步式细菌裂解技术,只需要一种溶液处理即可以完成细菌裂解,并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA。
试剂盒特点:
1.一步式裂解细菌,比传统的碱变性方法更快捷。
2.产量跟经典碱变性法相当或更高,产率一般为3-5μg质粒DNA/mL 饱和菌液(对高拷贝质粒而言)。
3. DNA 纯度高,OD260/280一般在1.8左右,基因组DNA和RNA污染少。
4.可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆、测序等实验。
5. 重复性和稳定性好。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 50ml |
| 离心吸附柱 | 50只 |
| 通用预洗液 | 50ml |
| 通用洗柱液 | 100ml |
| DNA洗脱液2.0 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输及保存(溶液A需要4℃保存),有效期一年。
使用方法:
1. 用塑料离心管收集不超过3mL 过夜培养饱和菌液,室温12000~15000g离心半分钟,弃上清。注意:不能超过3mL菌液,否则质粒回收率将急剧降低。
2. 加入0.6-1mL溶液A(用前需摇匀),充分吹打或振荡裂解细菌直到裂解变澄清,一般需要半分钟左右。注:此方法不同于碱裂解法,故可以充分吹打。
3. 将裂解液全部转移到离心吸附柱中,室温静置2分钟使质粒DNA与膜结合。室温12000~15000g离心半分钟,弃穿透液。如果一次不能将上清全部转移到离心吸附柱中,可以分两次进行。
4.在离心吸附柱中加入0.7mL的通用预洗液,室温12000~15000g离心半分钟,弃穿透液。注意: 如果通用预洗液放置在低温产生了沉淀,用前需要加热到60℃左右使之融化,混匀后再用。
5. 再在离心吸附柱中加入0.3mL的通用预洗液,室温12000~15000g离心半分钟,弃穿透液。此步预洗最好别省略,否则DNA 纯度不高。
6.在离心吸附柱中加入0.7mL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心半分钟,弃穿透液。
7. 再在离心吸附柱中加入0.7mL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心半分钟,弃穿透液。此为第二次洗涤。
8. 再在离心吸附柱中加入0.4mL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心半分钟,弃穿透液。此为第三次洗涤,如果不洗涤三次,最后得到的质粒DNA的OD260和280的比值达不到1.8。
9.室温 12000~15000g离心半分钟,甩干残留液体。注意:此步不能省略,否则残留乙醇会影响后续的电泳上样(DNA 沉不到加样孔里去)和酶反应。
10. 将离心柱置于一个新的1.5mL自备塑料离心管中,加入30-100μl DNA 洗脱液2.0,室温放置2分钟。如果将DNA 洗脱液2.0预热到65-80℃,则效果更好。
11.室温 12000~15000g离心半分钟,离心管底溶液即质粒DNA,可以直接用于后续实验或放冰箱长期保存。
注意:如果需要去除DNA样品中的内毒素,请使用百奥莱博的液相内毒素清除剂。
北京现货一步法质粒DNA提取试剂盒2.0厂家专业优质供应商:北京百奥莱博科技有限公司
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我公司生产的一步法质粒DNA提取试剂盒2.0纯度高价格低,质量有保证,客户更放心。我们为科研用户提供上千种生物试剂现货及sigma全线产品原装期货,货期短,价格低,质量好。用我们100%的真诚、热情换取您100%的信任与支持!
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| 编号 | 类别 | 名称 |
| BTN131185 | 细胞及免疫学 | ONPG溶液(10mg/mL) |
| BTN130637 | 工具酶 | Tma核酸内切酶III |
| BTN131098 | 蛋白质研究 | 生物素化的蛋白G |
| BTN100409 | 核酸扩增(PCR) | 6nt随机引物(0.5 ug/uL) |
| BTN111208A | 细胞及免疫学 | 植物线粒体纯化试剂盒A(粗提) |
| BTN101106 | 蛋白质研究 | 沉淀型TMB显色试剂盒 |
| BTN130889 | 蛋白质研究 | 昆虫细胞裂解液 |
| BTN80903 | RNA纯化 | 柱式植物RNA大量提取试剂盒 |
| BTN17-0090 | 工具酶 | 限制性内切酶HinfI |
| BTN131119 | 蛋白质研究 | HRP稳定剂/稀释剂 |
| BTN17-0270 | 工具酶 | 限制性内切酶SpeI(BcuI) |
| BTN60902 | 其他生化试剂 | Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH7.0)(不含RNase) |
| BTN3060 | RNA纯化 | 非冻型组织RNA保存液 |
| BTN131122 | 蛋白质研究 | 考马斯亮蓝R-250 |
| BTN130914 | 核酸扩增(PCR) | dGTP溶液(2.5mM) |
| BTN90602B | 核酸电泳和回收 | DNA marker(pBR322/MspI) |
| BTN100303 | DNA纯化 | 柱式真菌DNA提取试剂盒(玻璃珠法) |
| BTN121102 | DNA纯化 | 柱式鼠尾DNA提取试剂盒 |
| BTN140650 | 蛋白质研究 | 3mL亲和层析柱 |
| BTN100103A | 克隆与表达 | 裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒 |
| BTN131217 | 核酸扩增(PCR) | UTP溶液(2.5mM) |
| BTN3290 | RNA纯化 | RNase抑制剂(人源)(40U/μL) |
| BTN130862 | 细胞及免疫学 | DAPI干粉 |
| BTN90509 | 蛋白质研究 | 包涵体中量纯化试剂盒 |
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文献和实验,用Promega公司提供的Wizard基因组DNA提取试剂盒提取DNA, DNA置 4C保存待测。 TNF alpha -308G/A (TNF1/TNF2)的检测: 上游引物5’-AGGCAATAGGTTTTGAGGGCCAT-3’下游引物5’-TCCTCCCTGCTCCGATTCCG-3’,PCR参数:95C预变性2 min,进入35个循环:95C,1min; 56C,40 s; 72C,30 s。最终延伸72C,7 min。扩增含-308位点的片段107bp。经Nco I酶切4h
2.0,我感觉稍微低一点影响不算太大。问:我是RT-PCR的新手,想请教引物如何设计?【经验】如何确认RNA的质量各位都知道,提取到质量良好的RNA(包括总RNA和mRNA,以下同)是非常困难,关于RNA的提取技术,我就不说了,为什么呢?或许各位非常关心呢,我是这样想的,我可以看到的资料或者是厂家的说明书,各位也同样可以看到的,内容当然都是一样的了,所以实验做的好不好,主要是心的投入多少的问题,所以希望大家自己多多思考啊!以下两种方法,相信大家都知道的:1)检测RNA溶液的吸光度280、320
:已肯定该基因在两种组织中都表达,且内参照在两种组织都可扩增出来)。从这两种组织中提取的RNA的量是不一样的,我测过吸光度,差异还很大,会不会和这有关呢? 请高手指教! 解答: 1.RT-PCR有两种做法: 条件具备的话可用kit进行一步法进行;若条件不太好的话可分两步进行逆转录再PCR。但后来发现两步法的结果更加理想,条带特异性强且无拖尾现象,我推测是体系更加单一比较利于PCR的进行,当然也可能是我买的kit不太好。(promega)。 2.RT-PCR应具备的条件 高质量的RNA(保留
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