北京现货BTN130651型DNA促旋酶优惠价

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名称：北京现货BTN130651型DNA促旋酶优惠价
编号：BTN130651
规格：100U
英文名：DNA Gyrase(E.coli)
品牌：百奥莱博
产地：北京
DNA促旋酶(E.coli)是一种II型拓扑异构酶，在ATP存在下向DNA中引入负超螺旋。促旋酶全酶是由两个gyrA亚基(97 kDa)和两个gyrB(90kDa)亚基组成的异源四聚体。本产品主要用于向DNA引入负超螺旋。其反应原理图如下：


储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位是指在30μl反应体系中，37℃条件下，30分钟内催化超过95%的0.5μg底物转变为超螺旋质粒所需的酶量。DNA超螺旋化通过不含*化乙啶的琼脂糖凝胶电泳来检测。

热灭火：65℃加热20分钟。

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北京现货BTN130651型DNA促旋酶优惠价关键词：DNA Gyrase(E.coli),DNA促旋酶,BTN130651


·LB-Lennox培养基
编号：BTN100820
英文名称：LB-Lennox Medium Powder
规格：250g
LB培养基全名是Lysogeny Broth(非Luria-Bertani)，它是由美国科学家Giuseppe Bertani在1951年独立开发。Lennox将其Glucose去掉，并将NaCl浓度从0.5 g/L增加到15 g/L。本产品就是根据Lennox配方制备，可用于各种细菌培养。其盐浓度较LB Miller低一倍，主要跟盐敏感抗菌素(如Zeocine)一起使用。本产品加水灭菌后即得液体培养基，即可使用。配制一升液体培养基需要25g本产品。

储存条件：常温运输及保存，有效期半年。

·Phusion DNA聚合酶
编号：BTN130429
英文名称：Phusion DNA Polymerase
规格：100U
本产品是Phusion DNA Polymerase基因经过原核表达，并经多次纯化分离得到。该酶是由高保真Pfu DNA聚合酶和独特的双链DNA结合蛋白Sso7d融合而成，其结构示意图如下：


产品特点：
1．极强的DNA 持续合成能力，合成DNA 能力分别是Pfu DNA聚合酶和Taq DNA聚合酶的10倍和2倍。
2．快速，相比常用的DNA聚合酶，合成时间大大缩短，延伸速率为15-30s/kb。
3．可以短时间内高效、高保真扩增长片段DNA，最长可以扩增20Kb。
4．具有 5´-3´和3´-5´核酸外切酶活性，是目前保真度最高的热稳定性聚合酶，保真性是Taq DNA聚合酶的50倍，Pfu DNA聚合酶的6倍。
5．Phusion DNA聚合酶扩增的PCR产物为钝端双链DNA，不能直接用于AT克隆。

产品组成：

 

成分	规格
Phusion DNA Polymerase，2U/μL	50μl
5×Phusion HF Buffer	2×1.5ml
5×Phusion GC Buffer	1.5ml
50mM MgCl2 Solution	1.5ml
5×PCR Enhancer	500μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：DNA 模板、引物、dNTP、超纯水等。

使用方法：(以50μL的PCR反应体系为例)

1．设置PCR反应,在一干净的PCR管中，依次加入下列成分：

5×Phusion HF Buffer	10μL
DNA 模板(自备)	＜250ng
dNTP(2mM each)(自备)	5μL
PCR引物(自备)	10pmol each
5×PCR Enhancer(选择添加)	1.5μL
Phusion DNA Polymerase	0.5μL
补超纯水到	50μL

注：
⑴ 如果反应体系不是50μL，各成分需按等比例增加或减少，也可根据PCR特点自行调节Phusion DNA Polymerase、模板和引物的用量，进行体系优化。
⑵ 对于扩增困难或序列较长的模板(如富含GC的或具有复制二级结构的)，可用5×Phusion GC Buffer 代替5×Phusion HF Buffer来进行PCR反应。
⑶ 请最后将Phusion DNA Polymerase 加入到反应体系内，防止该酶具有的外切酶活性降解引物。
⑷ 5×Phusion HF Buffer中已含有1.5mM MgCl2。如有需要，可根据PCR反应特点额外添加MgCl2。
⑸ 对于GC含量较高的模板，可选择性加入5×PCR Enhancer。

2．PCR反应参数：

过程	温度	时间
预变性	98℃	30s-3min
PCR反应(25-35个循环)	98℃	5-10s
	45-72℃	10-30s
	72℃	15-30s/kb
最后延伸	72℃	5-10min

3．反应结束后取5-10μL反应产物，琼脂糖凝胶电泳分析。


北京现货BTN130651型DNA促旋酶优惠价关键词：DNA Gyrase(E.coli),DNA促旋酶,BTN130651


·T7核酸内切酶I
编号：BTN130635
英文名称：T7 Endonuclease Ⅰ
规格：250U
T7核酸内切酶I识别并切割不完全配对DNA、十字型结构DNA、Holliday结构或交叉DNA、异源双链DNA或者以更慢的速度切割含切刻的双链DNA。该酶切割错配碱基5´端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。其反应原理图如下：


产品用途：
1．识别错配DNA。
2．分解四方向交叉DNA或分支DNA。
3．检测或切割异源二聚体DNA和切刻DNA。
4．随机切割线性DNA进行shot-gun克隆。

产品组成：

成分	规格
T7 核酸内切酶I，10000U/mL	25μl
10×反应缓冲液	1.25ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指在 50μL反应体系，37℃条件下，1小时将90%以上的1μg超螺旋十字型结构的pUC(AT)转化成90%以上的线性结构所需要的酶量。
* pUC(AT)来自 pUC19，在其 EcoRI和PstI 位点之间的多克隆位点处有修改。

实验步骤举例(使用T7核酸内切酶I消化PCR产物确定基因打靶效率)：
1．在一个塑料离心管中，按次序加入下列成分：

成分	加入量
PCR产物	200ng
10×反应缓冲液	2μl
超纯水	补水到19μl

2．取上步溶液，在PCR 仪内进行如下操作：

步骤	温度	时间
初步变性	95℃	5min
Annealing	95-85℃	-2℃/second
	85-25℃	-0.1℃/second
Hold	4℃

3．添加T7核酸内切酶I至退火后的PCR产物(20μL体系)：

成分	加入量
PCR产物	19μl
T7 核酸内切酶I	1μl

4．37℃保温15分钟。
5．添加1.5μL 0.25M EDTA终止反应。

备注：
T7核酸内切酶I是一种具有底物结构选择性的酶。该酶以不同的活性作用于不同的DNA底物。切割特定底物时，必须控制酶量和反应时间。反应温度超过42℃时，会增加非特异性核酸酶活性。

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