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pUCm-T vector
一年
北京百奥莱博科技有限公司
低温运输,-20℃保存,有效期一年。使用方法:一. 实验准备1. PCR产物3´末端带有突出的A碱基:Taq、Tth、Ampli Taq、Klen Taq DNA聚合酶扩增的PCR产物3´末端均带有突出的A碱基。建议扩增的PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行回收,再进行连接转化实验。2. PCR产物3´末端没有突出的A碱基:Pfu、Pwo、Tli或DeepVent等DNA聚合酶具有3´5´外切酶活性,其扩增的PCR产物末端可能不带有3´A,要对这种平末端PCR产物进行克隆,应先对其进行3´末端加A,再进行连接转化实验。二.连接反应3.在一个标准的10mL连接反应体系中,加入下列成分:<table width=450 border=1 style="border-collapse:collapse;text-align:center;border:black;"><tr style="text-align:center;font-weight:bold;border-bottom:3px solid;background-color:#D7D1F8;"><td>反应组分<td>10μl反应体系<tr><td>插入的目的片段<td>xμL(0.2 pmol)<tr><td>本产品<td>1μL(50 ng)<tr><td>10×连接酶缓冲液<td>1μL<tr><td>T4 DNA连接酶<td>3-5 U<tr><td>补水到<td>10 L</table> 注意:一般最后加入T4 DNA连接酶。4. 用移液器吹打反应混合液使之混匀后,16-23℃连接1~12小时(或按T4 DNA连接酶供货商提供的操作手册进行连接)。三.细菌转化和鉴定5. 将100μl感受态细胞置于冰上解冻后,完全解冻后轻轻将细胞均匀悬浮。6. 加入上述5μl连接液,轻轻混匀,冰上放置30分钟。7. 42℃水浴热激90秒,再冰上放置15~20分钟。8. 加入400μl自备的SOC培养基,37℃ 200~250rpm振荡培养1小时。9. 4000rpm离心5分钟,用枪头吸掉400μl上清液,用剩余的培养基将细胞悬浮。10. 将细菌悬液均匀涂布在含20μl的IPTG(100mM)和100μl的X-gal(20mg/mL)的氨苄青霉素抗性的自备的LB平板上。(涂布菌液的用量可以根据连接的效率及感受态细胞的转化效率而进行适当的调整。)11. 将平板于37℃培养1小时,然后倒置培养过夜。(先将平板正向放置1小时,以吸收过多的液体。)四.筛选12.转化子的蓝白筛选: 当外源DNA片段插入到pUCm-T载体中后,由于外源DNA的核酸序列存在改变了LacZ基因的编码,从而影响了其产物β-半乳糖苷酶α-片段的活性,因此重组克隆在-gal/IPTG 平板上呈现为白色,而非重组克隆呈蓝色。选择在IPTG/X-gal 平板上生长的白色菌落,用牙签挑至含氨苄青霉素的液体培养基,37℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")pUCm-T载体优惠价,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:pUCm-T载体优惠价
编号:BTN160101
规格:1μg
英文名:pUCm-T vector
品牌:百奥莱博
产地:北京
本产品是一种高效克隆PCR产物(TA Cloning)的专用载体。本载体由pUC系列载体改造而成,在pUC载体的多克隆位点处插入特殊的限制性内切酶识别位点,酶切后能在载体的3´端形成悬挂的“T”末端。很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA 每条链的3´端加上一个突出的碱基A。这样,pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT 配对,在连接酶的催化下,就可以把PCR产物连接到,pUCm-T载体中,形成含有目的片断的重组载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片断的重组克隆,大大提高了3´末端A 突出PCR产物的连接、克隆效率。本产品应用于进行TA 克隆,克隆PCR产物。对克隆后的PCR产物可以用M13通用引物进行DNA 测序。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一. 实验准备
1. PCR产物3´末端带有突出的A碱基:Taq、Tth、Ampli Taq、Klen Taq DNA聚合酶扩增的PCR产物3´末端均带有突出的A碱基。建议扩增的PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行回收,再进行连接转化实验。
2. PCR产物3´末端没有突出的A碱基:Pfu、Pwo、Tli或DeepVent等DNA聚合酶具有3´5´外切酶活性,其扩增的PCR产物末端可能不带有3´A,要对这种平末端PCR产物进行克隆,应先对其进行3´末端加A,再进行连接转化实验。
二.连接反应
3.在一个标准的10mL连接反应体系中,加入下列成分:
反应组分 | 10μl反应体系 |
插入的目的片段 | xμL(0.2 pmol) |
本产品 | 1μL(50 ng) |
10×连接酶缓冲液 | 1μL |
T4 DNA连接酶 | 3-5 U |
补水到 | 10 L |
成分 | 规格 |
溶液A | 50ml |
酸洗玻璃珠,400μm | 25g |
溶液B | 15ml |
溶液C | 50ml |
离心吸附柱 | 50套 |
通用洗柱液 | 50ml |
RNA洗脱液 | 10ml |
说明书 | 1份 |
我公司生产供应销*(代"售")的克隆与表达正全品类优惠促销,十分期待您的咨询选购pUCm-T载体优惠价。
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