PCR级甲酰胺 核酸扩增(PCR)

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")PCR级甲酰胺 核酸扩增(PCR)，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：PCR级甲酰胺 核酸扩增(PCR)
编号：BTN100839
规格：250mg
英文名：Formamide，PCR Grade
品牌：百奥莱博
产地：北京
本产品为PCR级的甲酰胺，其可以促进某些引物、模板退火，降低带有二级结构的DNA的变性温度，是一种常用的PCR增强剂。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

我公司的PCR级甲酰胺 核酸扩增(PCR)，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·哺乳动物专用蛋白酶抑制剂
编号：BTN130527
英文名称：Protease Inhibitor for Mammal
规格：1mL
本产品为哺乳动物蛋白酶抑制混合液，溶剂为DMSO。专门用于裂解哺乳动物组织(如，血液、肝脏、肌肉等)时，抑制各种内源和外源蛋白酶活性，防止蛋白质降解。本产品抑制谱广，能特异性抑制丝*酸蛋白酶、半胱*酸蛋白酶、天门冬*酸蛋白酶和*基肽酶等各种蛋白酶活性。与各种细菌细胞裂解液兼容，在裂解液中加入1/100体积即可。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期两年。

·大肠杆菌TKB1化学感受态细胞
编号：BTN160688
英文名称：E.coli TKB1 Chemical Competent Cell
规格：0.1mL*10
 大肠杆菌TKB1感受态细胞是由BL21(DE3)衍生而来，含有酪*酸激酶(TyrosineKinase)。BL21(DE3)TK感受态细胞，简写为TKB1，带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝，该基因的启动子是LacUV5。本产品作为E.coli B 宿主菌，主要用来进行蛋白表达，细胞内缺少lon蛋白酶和ompT外膜蛋白酶，能够有效避免目的蛋白的降解。
 本产品通过IPTG 诱导表达的T7 RNA聚合酶，允许其下游目的蛋白表达，从而实现对下游目的蛋白的可控诱导型基因表达。TKB1感受态细胞内含有一个能有诱导表达酪*酸激酶基因的质粒(pTK)。TKB1感受态细胞能够转化进去ColE1 Origin 为复制起点的，包含有编码磷酸化目的基团或者蛋白的质粒。如果目的蛋白是构建在一个含有亲和标签的融合表达载体上面，那么对于磷酸化蛋白的纯化就会相对比较容易。从TKB1感受态细胞中纯化得到的目的蛋白，能够用来筛选表达库，或者亲和纯化和蛋白印记酪*酸磷酸化蛋白。

菌种的基因型为：F-dcm ompT hsdS(rB-mB-)gal λ(DE3)[pTK Tetr]。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞处于冰水混合状态时，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被10-100 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴25分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟，晃动会降低转化效率。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，200rpm 振荡培养60分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃倒置培养12-16小时。

注意事项：
1. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
2. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(5000rpm，1分钟)收菌后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
3. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
4. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。


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YT472 C端Myc标签融合蛋白质粒 C-Myc plasmid（with CMV promoter）
ALH157 细胞凋亡DNA Ladder提取试剂盒 Cells Apoptosis DNA Ladder Extraction Kit
BTN120520 大肠杆菌OrigamiB(DE3)化学感受态细胞 E.coli OrigamiB(DE3) Chemical Competent Cell
RFT013 2kb DNA ladder(100～2000bp)
SY0167 MEF2-GFP报告基因质粒 MEF2 GFP Reporter Plasmid
HR0475 Caspase 3抑制剂 Caspase 3 inhibitors
WE0196 固定组织RNA提取试剂盒 RNAtiqu FFPE RNA Extraction Kit
SV0581 PaeR7I限制性内切酶 PaeR7I Restriction Endonuclease
SY0530 硫*(代"酸")链霉素 Streptomycin Sulfate
KFS289 N-乙酰半胱*酸(抗氧化剂)(NAC) N-acetyl-L-cysteine
YT207 ARE凝胶迁移突变探针(10μM) ARE Mutation Probe For EMSA(10μM)
SV1401 链霉亲和素磁珠
BTN3130A 三合一RNA上样液(A型,6X) RNA Loading Buffer
YT004 酵母质粒小量抽提试剂盒 Yeast Plasmid Mini Preparation Kit
YT620 SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X) SDS-PAGE Sample Loading Buffer，5X
HR0023 胞浆蛋白提取试剂盒 Cytoplasmic Protein Extraction Kit
BTN100302 包涵体蛋白溶解及复性套装 Inclusion Body Protein Solubilization & Refolding Pack
RFT117 pUC18载体 pUC18 vector
SY0271 饱和酚 Tris-saturated Phenol Tris
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·SuperTOPO-Kan TA克隆试剂盒
编号：BTN160686-25K
英文名称：SuperTOPO TA Cloning Kit
规格：25次
本试剂盒是基于Topoisomerase能够在几秒钟之内高速连接DNA片段的原理开发的无背景克隆试剂盒，它使用了本公司通过定点突变改良的TOPO酶，连接效率比野生型更高。

产品特点：
1.高效快速，连接反应几乎在几秒钟内完成，连接率几乎达到100%。
2.适用于具有A 尾巴的DNA片段使用。
3. 无杂带或引物二聚体的PCR扩增产物可以不经过纯化直接用于连接反应。
4.转化时只需要37℃,10分钟复苏即可涂盘，免去冰浴、热休克和复苏步骤。
5. 零背景，无需IPTG-X-Gal蓝白斑筛选，故不需要IPTG-X-Gal培养基。
6. 本试剂盒按10μL标准反应体系，有25次和50次两种规格包装供选择。
7. 提供含Amp和Kan两种抗性的载体供选择(BTN160686-25A是含Amp抗性TOPO载体，BTN160686-25K是含Kan抗性TOPO载体)。

试剂盒组成：

 

成分	规格
SuperTOPO-Amp载体	25μl(BTN160686-25A)
SuperTOPO-Kan载体	25μl(BTN160686-25K)
连接缓冲液	25μl
超纯水	1ml
说明书	1份

注意：BTN160686-25A提供SuperTOPO-Amp载体，BTN160686-25K提供SuperTOPO-Kan载体。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

1. PCR扩增或酶切回收DNA插入片段。如果是PCR制备插入片段，所用引物不能磷酸化，使用Taq系列的DNA聚合酶。
2.电泳检测并相对定量PCR片段或酶切回收片段(跟DNA marker比较)。
 并根据插入片段长度和下表确定每次连接反应需要的最佳用量：

插入片段长度	最佳用量
100-1000bp	20-50ng
1000-2000bp	50-100ng
2000-5000bp	100-200ng

3.在一个干净的塑料离心管中，室温下(不要放在冰上)设置如下连接反应体系：

成分	用量
纯化后的PCR产物	不超过8μl(详见注意事项)
SuperTOPO-Amp载体或 SuperTOPO-Kan载体	1μl
连接缓冲液	1μl
超纯水	补到10μL

 注意：如果使用未经纯化的PCR产物，则需要加入量不能超过1μL，否则PCR 体系会干扰连接体系。
4. 轻柔吹打混匀后，短暂离心，常温(20-30℃)放置0-5分钟。如果在冬天室温低于20℃，建议使用25℃水浴或金属浴。注意：连接时间超过5分钟的话连接效率会降低。
5. 如果当天不转化，可以将离心管放-20℃保存。如果转化，则取5μL连接液加到50-100μL刚刚融化的感受态细胞中，轻柔混匀。注意：本产品要求感受态细胞的转化效率不得低于5﹡10E7cfu/ug。
6. 如果片段长度小于2Kb，则不需要冰浴和热激，直接在离心管中加入500μL不含抗菌素的SOC或LB培养基，然后取200μL涂盘。也可以先3000g离心2分钟后，弃掉大部分上清，只留约100μl左右，然后重悬细菌后全部涂盘在含Amp(对SuperTOPO-Amp)或Kan(对SuperTOPO-Kan)的培养皿上，37℃过夜培养。
7. 如果片段长度长于2Kb，则按常规转化方式，先冰浴2-30分钟，然后42℃热激30秒，冰上防放置2分钟，再在离心管中加入500μL不含抗菌素的SOC或LB培养基，37℃ 250rpm培养60分钟，然后取200μL涂盘。也可以先3000g离心2分钟后，弃掉大部分上清，只留约100μL左右，然后重悬细菌后全部涂盘在含Amp(对SuperTOPO-Amp)或Kan(对SuperTOPO-Kan)的培养皿上，37℃过夜培养。
8. 用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定重组子。

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