Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒 核酸扩增(PCR)

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百奥莱博专业生产供应Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒 核酸扩增(PCR)，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒 核酸扩增(PCR)
产地：国产|进口
编号：BTN131083
英文名：Ribo-SPIA RNA Amplification Kit
血液样品和各种临床样品(包括组织检查、FFPE切片或少量细胞样品)都是基因表达分析和诊断的常见材料，但这些样品通常数量有限，质量不高，还没法进行第二次取样。所以得到足够RNA量供后续试验是一个非常棘手的瓶颈。为解决这一问题，本公司根据Ribo-SPIA技术，开发了本产品。Ribo-SPIA技术的核心是利用DNA/RNA嵌合引物，以带polyA尾巴的mRNA为模板进行逆转录并得到双链cDNA、RNase H不间断地在cDNA第1链中的RNA部分产生裂口，DNA聚合酶以此裂口为基础进行链取代聚合反应，产生cDNA单链。

产品特点：
1.高效，能线性扩增1000-10000倍，能用5-100 ng总RNA模板扩增得到5μg左右的单链cDNA(扩增的cDNA主要来源于总RNA中的mRNA)。
2. 步骤简单方便，扩增在恒温进行，只需要4个小时，不需要特殊仪器设备。
3. 保真性好，保持RNA样品中各分子的相对丰度。
4. 尤其适用于RNA产量和质量都不高的样品。
5.扩增得到的单链cDNA能直接用于各种后续试验，包括qPCR、芯片分析、杂交反应等。
6. 本产品足够做10次双链cDNA的合成，20次SPIA扩增。

试剂盒组成：

 

成分	规格
cDNA一链合成缓冲液	40μl
MMLV逆转录酶	10μl
cDNA二链合成缓冲液，5×	160μl
cDNA二链合成酶混合液20×	40μl
SPIA RT引物	40μl
SPIA反应液，5×	320μl
SPIA扩增引物	320μl
SPIA酶混合液	120μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为1年。

使用方法：

一：样品RNA的制备
本产品不含RNA相关试剂，用于Ribo-SPIA扩增的每个批次的RNA样品最好先做一个预实验。总RNA样品的浓度必须在1-20ng/μL，一次RIBO-SPIA所需总RNA的量为1ug。也可以使用mRNA，一次Ribo-SPIA所需总mRNA的量为5-100 ng。过低则需要浓缩，过高则需要用无RNase的水稀释。RNA必须经过DNase处理，不能含DNA污染。微量提取时不能使用核酸类的助沉剂。注意：本产品只能扩增含带polyA尾巴的RNA，不能扩增DNA和不含polyA尾巴的RNA。

二：一管式双链cDNA的合成
1.在0.5mL PCR管中，按下表配制双链cDNA合成反应。
注意：最好每次实验设置一个阴性对照组，在此对照中用超纯水替代自备的mRNA或总RNA:

成分	用量
自备mRNA或总RNA	4μL mRNA(5-100ng)或4μL总RNA(1ug)
SPIA RT引物MTA3 20uM	1μl
65℃，5分钟后室温放置2分钟，短暂离心后放4℃
cDNA一链合成缓冲液	4μl
MMLV逆转录酶	1μl
轻柔吹打混匀后得到10μL的反应体系。42℃保温90分钟合成第一链cDNA。结束后70℃保温15分使酶变性，最后4℃放置，然后加入下列成分，得到80μL反应体系。
超纯水	50μl
cDNA二链合成缓冲液	16μl
cDNA二链合成酶混合液	4μl
轻柔吹打混匀后，短暂离心，16℃保温2小时合成cDNA第二链，然后75℃ 15分灭活酶，最后4℃放置待用

三：SPIA扩增
2.在0.5mL PCR管中，按下表配制20μL的SPIA反应体系。注意：最好设置两个阴性对照组，在此两个对照中分别用超纯水替代SPIA引物和cDNA双链反应液。

成分	用量
cDNA双链反应产物	40μL(来于上步)
SPIA扩增引物10uM	16μl
SPIA反应液，5×	16μl
超纯水	42μl
94℃20秒后50℃放置复性待用
SPIA酶混合液	6μl
轻柔吹打混匀后得到120μL反应体系，50℃扩增60分钟，最后4℃放置

四：SPIA扩增产物的检测
3. 取5μL SPIA扩增产物进行PAGE电泳检测。标准的反应结果是产生长度在200-2000bp之间的产物。
4. 如果产物将用于PCR定量，则可以不经过纯化直接使用，如果需要用于芯片杂交和浓度测定，则需要按常规的方法纯化cDNA以便去除残留的dNTP和引物。
5. OD检测纯度和浓度。在OD260的波长下测样品你给的光吸收。由于扩增产物是单链DNA，故1OD260=33ug/mL。
6. 所得DNA可以放-20℃长期放置。

更多有关Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒 核酸扩增(PCR)的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：
66-22-8 Uracil   尿嘧啶
葡萄糖-6-磷酸脱*酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)   100T
ARB10448 人甲酰甲硫*酸(fMet)elisa测定使用说明书 Human formylmethionine,fmet ELISA KIT
PY02-118  葡萄糖肉浸液肉汤  250克  
脱*后碱处理液   500ml
ARB12011 大鼠Toll样受体4(TLR4)尿液中含量检测 Rat toll-like receptor 4,tlr4 ELISA KIT
Acr-Bis(40%,19:1)   500ml
CYB164011 羊抗人IgG(1：500～2000)-HRP
ARB12748 小鼠CD19分子(CD19)Elisa分析 Mouse cluster of differentiation 19,cd19 ELISA KIT
7365-45-9 N-2-哌*(代"嗪")-N"-2-乙磺酸 HEPES
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002015 肝素*抗凝兔血 100ml|500ml
BL0965 封闭绵羊血清正常(原液) 10ml
2×Taq plus MasterMix 500μl|5×500μl
对*基*甲*(代"酸") Bismuth subsalicylate 150-13-0
ARB10800 人抗可提取核抗原抗体(ENA-Ab)含量测试 Human anti-extractable nuclear antigen antibody,ena-ab ELISA KIT
碱性品红水溶液(1%)   100ml
ARB14237 猪蓝耳病毒(PRRSV)含量检测 
ARB12901 小鼠白介素1(IL-1)代做ELISA实验 Mouse interleukin 1,IL-1 ELISA KIT
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·12mL亲和层析柱
编号：BTN140651
英文名称：Affinity Chromatography Colum(12mL)
规格：12mL
本产品适用范围广泛，可用于纯化分离重组蛋白、抗体和抗原、多肽、糖蛋白、磷酸化蛋白、DNA及DNA结合蛋白等生物大分子；还可以用于去除生物样品中的内毒素等污染。

亲和层析是利用生物分子间所具有的专一亲和力而发明的纯化技术。它是利用生物分子间存在的特异性相互作用(如抗原－抗体、酶－底物或抑制剂、激素－受体等)，通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。

亲和层析柱常见的使用方法有重力法、手动加压法、蠕动泵法，其示意图如下：


储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

常用亲和标签及纯化方案：



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碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸*二*比色法)   50T|100T
113-24-6 Pyruvic Acid 丙*(代"酮")酸*
BL0796 鸡IgG抗原(液体)
去氧野艽霉素盐*(代"酸")盐 PAR sodiu*(代"m") salt 73285-50-4
核固红染色液  0.1%|0.2% 100ml
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108321-42-2 G-418 遗传霉素
磷酸葡萄糖异构酶 Sephadex LH-20 9001-41-6
ARB13970 猪胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)Elisa定量检测 Porcine insulin-like growth factors binding protein 3,igfbp-3 ELISA KIT
ARB13808 豚鼠降*素基因相关肽(CGRP)elisa检测操作说明书 Guinea pig calcitonin gene related Peptide,cgrp ELISA KIT
ARB13089 小鼠细胞色素氧化酶(CC0)ELISA检测服务 Mouse cytochrom-oxidase,cco ELISA KIT
盐*(代"酸")付玫瑰**(代"胺") Indoxyl-Glucuronide 569-61-9
BL1297 GST标签纯化树脂(GST Resin)
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ARB10792 人抗内因子抗体(IFA)含量测试 Human intrinsic factor antibody,ifa ELISA KIT
BTN3180 *化乙锭溶液 Ethidium Bromide Solution
ARB13528 兔p53(p53)含量检测 Rabbit p53/tumor protein,p53/tp53 ELISA KIT

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