北京现货BTN121205型CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂

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名称：CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒
编号：BTN121205
规格：5mL
英文名：Cell Counting Kit-8
品牌：百奥莱博
产地：北京
本CCK-8试剂盒是基于WTS-8的第二代细胞增殖及毒性检测产品，主要成分为水溶性四唑盐WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝*基)-3-(4-硝*基)-5-(2,4-二磺基*)-2H-四唑单*盐，WST-8为一种MTT类似物，在电子耦合试剂1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成橙黄色水溶性的甲臜(formazan)。生成的甲臜量与活细胞数量成线性相关。

产品特点：
1．溶液稳定，对细胞无毒性，可直接同步加入到细胞样品中长时间孵育，可以多次测定选取最佳测定时间。
2．灵敏度高，实验的灵敏度比其它如MTT，XTT或MTS高，操作简便、快捷，实验结果重复性好。
3．水溶性，免去后续的溶解步骤。
4．不需要换液，尤其适合于悬浮细胞。
5．安全无毒，不会对操作人员身体造成危害。
6．可以广泛应用于生物活性因子的活性检测、药物的筛选、细胞增殖检测、细胞毒性。

储存条件：常温运输和4 ℃干燥避光保存，有效期一年。

使用方法：

一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时测定细胞具体数量时)
1．先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2．按比例(例如：1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
3．接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加 CCK 试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴)，OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间)。

二、细胞活性检测
1．在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板在培养箱中预培养24小时(37℃,5% CO2)。
2．每孔加入10μL的CCK溶液。
3．将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4．用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
5．如果暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl溶液或者 1%w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

三、细胞增殖-毒性检测
1．在96孔板中配置 100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(37℃，5%CO2)。
2．向培养板中加入10μL不同浓度的待测物质。
3．将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如：6、12、24或48小时)。
4．向每孔加入10μL CCK溶液。
5．将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。
6．用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
7．如果暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl溶液或者1%w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

注意事项：
1．如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基)，去掉药物影响。如果药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
2．用酶标仪检测前请确保孔内没有气泡，否则会干扰测定。
3．建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。
4．有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加入CCK试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰OD 值读数。
5．白细胞可能需要培养较长时间。
6．当使用标准 96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1000个/孔(100μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2500个/孔(100μL培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。
7．如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片，但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。
8．培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

结果分析：
细胞活力*(％)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)]×100
A(加药)：具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白)：具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0加药)：具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力
关键词：CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒,Cell Counting Kit-8,BTN121205


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