1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的 1/10。 2. 当质粒不纯或存在盐,乙醇,蛋白及缓冲液等污染时,转化效率急剧下降。 3. 若转化大质粒或想获得较高转化效率,推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。 4. 对于连接产物转化,最好转化前用乙醇沉淀 DNA 后适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产物,保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化 效率,增加打火的风险。 5. 混入质粒时应轻柔操作。 6. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。