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- Cmbio
- 上海
- CM-6030K
- 2025年09月01日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
零下80度
- 保质期：
1年
- 英文名：
DH10B 电转化Chemically Competent Cell
- 库存：
1000只
- 供应商：
上海淳麦
- 规格：
20*100ul
DH10B Electroporation-Competent Cell
DH10B 电击感受态细胞基因型：
F- mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC) 80lacZM15 lacX74 recA1 endA1 araD139 (ara, leu)7697 galE15 g alK λ- rpsL nupG
DH10B 电击感受态细胞简要说明：
High5TM 系列 DH10B 感受态细胞只能用于电击转化而不能用于热激转化。
DH10B 菌株来源于 MC1061 菌株，mcrA、mcrBC 及 mrr 突变使 DH10B 菌株适合于克隆富 含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA (无论真核生物还是原核生物的基因组 DNA 都能被高效的转入 DH10B 中)。recA1 和 endA1 的突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。 φ80dlacZ∆M15 标记的存在使 DH10B 可用于蓝白斑筛选，rpsL 赋予其链霉素抗High5TM 系列 DH10B 感受态细胞适用于大质粒的构建或者各种文库构建。High5TM 系 列 DH10B 感 受 态 细 胞 经 特 殊 工 艺 制 作 ， 经 pUC19 质 粒 检 测 ， 转 化 效 率>1010cfu/μg。
DH10B 电击感受态细胞操作说明：
1. 0.1cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使
乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，
冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 High5TM 系列 DH10B 感受态细胞放入冰浴中融化，加入 1 μl 目的 DNA (质 粒或连接产物)并用手拨打 EP 管底轻轻混匀立即插入冰中。
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19；
B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重 悬，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。
3. 用 200 μl 枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=2.4 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，使用者也 可按所用电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
5. 向电击杯中加入 700 μl 不含抗生素的无菌培养基 S.O.C.，混匀后转移到空 EP 管中，37℃，200 rpm
复苏 60 分钟。
6. 5000rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。将平 板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 13h。
DH10B 电击感受态细胞注意事项：
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的 1/10。
2. 当质粒不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
3. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转 化效率下降一个数量级。
4. 对于连接产物转化，最好转化前用乙醇沉淀 DNA 后适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化 效率，增加打火的风险。
5. 混入质粒时应轻柔操作。
6. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
DH5α感受态细胞 TOP10感受态细胞 TOP10F′ 感受态细胞 Mach1-T1感受态细胞 T1感受态细胞 JM109感受态细胞 JM110感受态细胞 XL1-Blue感受态细胞XL2-Blue感受态细胞 DB3.1感受态细胞 Stbl2感受态细胞 Stbl3感受态细胞 XL10-Gold感受态细胞 TG1感受态细胞 HB101感受态细胞 SURE感受态细胞 DH10B感受态细胞 DH10Bac感受态细胞 BJ5183感受态细胞BJ5183-AD-1感受态细胞 Stable感受态细胞 Turbo感受态细胞 F-DH5α感受态细胞 F-TOP10感受态细胞 DH5a 电转化感受态细胞 TOP10 电转化感受态细胞 SURE 电转化感受态细胞 BJ5183 电转化感受态细胞 BJ5183-AD-1 电转化感受态细胞 DH10B 电转化感受态细胞 XL1-Blue 电转化感受态细胞 stable 电转化感受态细胞 TG1 电转化感受态细胞EPI400感受态细胞 EPI400 电转化感受态细胞 BL21感受态细胞 BL21(DE3)感受态细胞 BL21(DE3)pLysS感受态细胞 BL21(AI)感受态细胞 BL21 Star(DE3)感受态细胞 BL21-Star(DE3)pLysS感受态细胞 BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL感受态细胞 Rosetta(DE3)感受态细胞Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cell Rosetta-gami B(DE3)感受态细胞Rosetta-gami 2(DE3)感受态细胞 OrigamiB(DE3)感受态细胞 TB1感受态细胞 OverExpress C43(DE3)感受态细胞 Tuner(DE3)感受态细胞 ER2566感受态细胞 F-BL21(DE3)感受态细胞GV3101感受态细胞 EHA105感受态细胞 AGL1感受态细胞 LBA4404感受态细胞 EHA101感受态细胞 GV3101 电转化感受态细胞 EHA105 电转化感受态细胞 AGL1 电转化感受态细胞LBA4404 电转化感受态细胞 EHA101 电转化感受态细胞 Y1HGold感受态细胞 Y2HGold感受态细胞 AH109感受态细胞 Y187感受态细胞 EGY48感受态细胞 NMY51感受态细胞
上海淳麦生物科技有限公司专注于感受态细胞、质粒、载体、农杆菌、酵母等生命科学领域的产品研发和技术服务支持。
上海淳麦生物科技有限公司在感受态细胞的研发方面，实力雄厚，拥有了克隆、表达、酵母和农杆菌4大类，共计百余种感受态细胞。在电击感受态方面，拥有了大肠杆菌和农杆菌电击感受态种类，极大提高了客户在转基因以及文库构建方面的成功率。
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文献和实验1．电转化感受态细胞的制备 1. 用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培养基和枪头的空白对照） 2. 37℃，220rpm，培养14-16个小时。 3. 第二天，以1：100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中，37度，220rpm，振摇2-3小时，每半小时测一次OD，当OD值达到0.3-0.4时，停止培养。 4. 将菌液在冰上预冷30分钟，随后将菌液分装到500ml 预冷的离心
试剂准备： LB培养基: 500mL 双蒸水：600mL 高压灭菌 预冷 10%甘油：1000mL 预冷 250ml离心杯：高压灭菌 预冷 50mL离心管数个，250mL摇瓶4个，1.5mL EP管 高压灭菌 制备步骤： 1、接种原代菌（DH5α或DH10B），次日挑取单菌落，放入1mL LB培养基中，37℃，300rpm，6 hr
Prior to getting cells:1) Turn on 42 deg bath. Takes about 30 min to reach 42 deg.2) Put 0.1 M sterile CaCl2 on ice.3) One tube of cells is good for several transformations.For two transformations:1) Put 10 μl of your ligation
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