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- Cmbio
- 上海
- CM-6025K
- 2025年08月31日
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- 详细信息
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
零下80度
- 保质期：
1年
- 英文名：
DH5a 电转化Chemically Competent Cell
- 库存：
1000只
- 供应商：
上海淳麦
- 规格：
20*100ul
DH5α Electro
DH5α Electroporation-Competent Cell
产品规格:
| DH5α Electroporation-Competent Cell | 50μl×5 |
| pUC19 (control vector, 10pg/μl) | 10μl |
DH5a 电转化感受态细胞基因型：
F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1
gyrA96 relA1 phoA
DH5a 电转化感受态细胞简要说明：
CMbio-DH5α电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。 CMbio-DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。
缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒 DNA 的产量和质量；重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率，保证 了插入 DNA 的稳定性；lacZΔM15 的存在使 DH5α可用于蓝、白斑筛选。
CMbio-DH5α电击感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率可达 1×1010 cfu/μg DNA。
DH5a 电转化感受态细胞操作说明：
一、0.1cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使乙醇充分挥
发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置 5 分钟充分降温。 二、取-80℃保存的 DH5α电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。-CMbio
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； -CMbio
B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 TE 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬，DNA 浓度 不超过 100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态。 -CMbio
三、用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。 四、启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪 推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。-CMbio
五、2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电 击杯底部数次混匀后，转移到 50ml 离心管（BD Falcon50ml 锥形离心管等），向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。 37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。-CMbio
六、5000rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大，若全部涂 板请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。-CMbio
DH5a 电转化感受态细胞注意事项：
（一）加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。-CMbio
（二）电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
（三）当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。-CMbio
（四）电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
（五）若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率 下降一个数量级。-CMbio
（六）对于连接产物转化，最好转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA) 重悬产物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电
的风险。-CMbio
（七）混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm) 避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板 的菌量。-CMbio
（八）电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。-CMbio
DH5α感受态细胞 TOP10感受态细胞 TOP10F′ 感受态细胞 Mach1-T1感受态细胞 T1感受态细胞 JM109感受态细胞 JM110感受态细胞 XL1-Blue感受态细胞XL2-Blue感受态细胞 DB3.1感受态细胞 Stbl2感受态细胞 Stbl3感受态细胞 XL10-Gold感受态细胞 TG1感受态细胞 HB101感受态细胞 SURE感受态细胞 DH10B感受态细胞 DH10Bac感受态细胞 BJ5183感受态细胞BJ5183-AD-1感受态细胞 Stable感受态细胞 Turbo感受态细胞 F-DH5α感受态细胞 F-TOP10感受态细胞 DH5a 电转化感受态细胞 TOP10 电转化感受态细胞 SURE 电转化感受态细胞 BJ5183 电转化感受态细胞 BJ5183-AD-1 电转化感受态细胞 DH10B 电转化感受态细胞 XL1-Blue 电转化感受态细胞 stable 电转化感受态细胞 TG1 电转化感受态细胞EPI400感受态细胞 EPI400 电转化感受态细胞 BL21感受态细胞 BL21(DE3)感受态细胞 BL21(DE3)pLysS感受态细胞 BL21(AI)感受态细胞 BL21 Star(DE3)感受态细胞 BL21-Star(DE3)pLysS感受态细胞 BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL感受态细胞 Rosetta(DE3)感受态细胞Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cell Rosetta-gami B(DE3)感受态细胞Rosetta-gami 2(DE3)感受态细胞 OrigamiB(DE3)感受态细胞 TB1感受态细胞 OverExpress C43(DE3)感受态细胞 Tuner(DE3)感受态细胞 ER2566感受态细胞 F-BL21(DE3)感受态细胞GV3101感受态细胞 EHA105感受态细胞 AGL1感受态细胞 LBA4404感受态细胞 EHA101感受态细胞 GV3101 电转化感受态细胞 EHA105 电转化感受态细胞 AGL1 电转化感受态细胞LBA4404 电转化感受态细胞 EHA101 电转化感受态细胞 Y1HGold感受态细胞 Y2HGold感受态细胞 AH109感受态细胞 Y187感受态细胞 EGY48感受态细胞 NMY51感受态细胞
上海淳麦生物科技有限公司专注于感受态细胞、质粒、载体、农杆菌、酵母等生命科学领域的产品研发和技术服务支持。
上海淳麦生物科技有限公司在感受态细胞的研发方面，实力雄厚，拥有了克隆、表达、酵母和农杆菌4大类，共计百余种感受态细胞。在电击感受态方面，拥有了大肠杆菌和农杆菌电击感受态种类，极大提高了客户在转基因以及文库构建方面的成功率。
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文献和实验1．电转化感受态细胞的制备 1. 用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培养基和枪头的空白对照） 2. 37℃，220rpm，培养14-16个小时。 3. 第二天，以1：100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中，37度，220rpm，振摇2-3小时，每半小时测一次OD，当OD值达到0.3-0.4时，停止培养。 4. 将菌液在冰上预冷30分钟，随后将菌液分装到500ml 预冷的离心
试剂准备： LB培养基: 500mL 双蒸水：600mL 高压灭菌 预冷 10%甘油：1000mL 预冷 250ml离心杯：高压灭菌 预冷 50mL离心管数个，250mL摇瓶4个，1.5mL EP管 高压灭菌 制备步骤： 1、接种原代菌（DH5α或DH10B），次日挑取单菌落，放入1mL LB培养基中，37℃，300rpm，6 hr
体外连接的DNA重组分子导入合适的受体细胞才能大量增殖。为了提高受体菌摄取外源DNA的能力，提高转化效率以获得更多的转化子，人们摸索出了不同的方法处理细菌，使其处于感受态。目前主要采用电转化法和CaCl2法将外源DNA导入受体细胞中，并需要相应地制备电转化感受态细胞和CaCl2感受态细胞。实验目的：学习感受态细胞的制备过程实验材料：大肠杆菌菌株DH5a或DH10B实验原理：电转化法是利用瞬间高压在细胞上打孔，因而需用冰冷的超纯水多次洗涤处于对数生长前期的细胞，以使细胞悬浮液中应含有尽量少的导电
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