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3135
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连桥生物
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文献和实验素B1、B12、C和泛酸、抗生素、酶、植物 提取液（活性丧失）。所以，原生质体培养用培养基应采用过滤法灭菌。 表4 培养基或无菌水的最少灭菌时间 容器分装体积（mL） 121℃下最少灭菌时间（min） 20~60 15 75~150 20 250~500 25 1000以上 30以上 过滤灭菌可以除去溶液或液体培养基中直径大于过滤膜网孔直径的微粒、微生物 和病毒。与高压蒸气灭菌法相比，该法不会改变那些在高压蒸气灭菌中不稳定物质，但是也有些明显的缺点
美国JRH公司EX-CELLTM 302无血清培养基配制方法
使用孔径为0.45um复合0.20um的低蛋白结合能力的双层滤膜进行过滤，推荐使用德国赛多利斯公司的醋酸纤维素材质(CA)的过滤器。 12. 为防止CO2丢失，推荐使用蠕动泵或惰性气体(例如氮气)以提供2～15 psi的正压;不要使用CO2气体; 13. 需要添加L-谷氨酰胺的，在培养液使用前添加20 ml/L的200mM浓度的L-谷氨酰胺溶液(JRH订货号59202)，使其工作浓度达到4 mM。 14. 在无菌条件下分装培养液到合适的无菌容器中，培养液要低温
1.针头滤器的使用丁香园网友heyj的观点为：用滤膜孔径为0.22um的一次性针头滤器过滤胰酶，一次可以过滤100ml。如果想一次性过滤完可以准备1-2个备用的。注意在配胰酶溶液时尽量完全溶解，否则未溶的颗粒会堵住滤孔影响过滤速度。本人认为过滤效果与滤过的液体量无关。丁香园网友ssl3304的观点为：过滤0.25的胰酶，一次可以滤1L，没有问题的，培养基最多300-400ml，总之一定要充分溶解后再过滤。丁香园网友shaoqianqian的观点为：滤200ml培养液足够了，可是不能滤加
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