美国JRH公司EX-CELLTM 302无血清培养基配制方法

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EX-Cell TM 302 无血清培养基

订货号： 干粉培养基：24324(含酚红)、24326(不含酚红)

&NBS p;                液体培养基：14324(含酚红)、14326(不含酚红)

&NBS p;                (酚红含量为0.00657g/L)

必需的仪器及试剂：

磁力搅拌器、pH计或pH试纸，1N氢氧化钠，1N盐酸

请严格按照以下步骤溶解制备无血清培养基

1. 确保用于制备无血清培养基的超纯水的水温处于20～30摄氏度，并以25度为最佳，并且在整个溶解配置过程中注意维持水温在20度以上(推荐水浴保温，但是不推荐使用直接电加热和火焰加热的方式);

2. 准确称量需要溶解制备的EX-Cell TM 302 无血清培养基干粉总量，配置每升培养液需要称取21.21克的培养基干粉(21.21g/L);

3. 将配制培养基液体的容器置于磁力搅拌器上，在容器内加入相当于最终体积80%~90%的超纯水(细胞培养 级)，并且在搅拌的条件下(搅拌所形成的漩涡，要向下深入到液面以下，达到相当于整个液面以下四分之三的位置为佳，如右上图所示)逐渐分批地加入培养基干粉。在上一部分加入的培养基干粉基本溶解后，再加入下一部分的培养基干粉;注意：是把培养基干粉加入到水里，而不是把水加到培养基干粉里去!!

4. 用少量的超纯水(细胞培养级)冲洗清空后的盛放培养基干粉的容器，使剩余的微量培养基粉末都加到溶液中;

5. 继续搅拌直至培养基干粉彻底溶解。搅拌所形成的漩涡，要向下深入到液面以下，达到相当于整个液面以下四分之三的位置为佳，如右上图所示;

6. 对于EX-CELL 302 的编号为24324的培养基，加入1.6g/L的碳酸氢钠(JRH订货号90421)或21.3ml/L的7.5%的碳酸氢钠溶液(JRH订货号59221);对于EX-CELL 302 的编号为24326的培养基，加入1.6g/L的碳酸氢钠(JRH订货号90421)或21.2ml/L的7.5%的碳酸氢钠溶液(JRH订货号59221)，持续搅拌直到完全溶解;

7. 在搅拌的条件下，用1N当量的NaOH溶液或1N当量的HCl溶液调节pH到6.9~7.1，不要过度调节pH，以免加入过量的NaOH和HCl;

8. 在过滤后，此溶液的pH值会上升0.1~0.2个单位。对于大多数细胞培养要求来说，经过过滤以后的培养液的pH值以7.0~7.4为佳;

9. 加入超纯水(细胞培养级)，补足溶液到最终体积。持续搅拌至少60分钟以上;

10. 为了避免pH值的变化，在过滤之前，应将培养液密闭暂存;

11. 对培养液进行除菌过滤时，应使用孔径为0.45um复合0.20um的低蛋白结合能力的双层滤膜进行过滤，推荐使用德国赛多利斯公司的醋酸纤维素材质(CA)的过滤器。

12. 为防止CO2丢失，推荐使用蠕动泵或惰性气体(例如氮气)以提供2～15 psi的正压;不要使用CO2气体;

13. 需要添加L-谷氨酰胺的，在培养液使用前添加20 ml/L的200mM浓度的L-谷氨酰胺溶液(JRH订货号59202)，使其工作浓度达到4 mM。

14. 在无菌条件下分装培养液到合适的无菌容器中，培养液要低温(2～8度)避光保存。