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一年
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北京百奥莱博科技有限公司
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4℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售"),产品线涵盖北京即用型免疫组化试剂盒(SABC-POD)(小鼠IgG)说明书在内的细胞生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称:北京即用型免疫组化试剂盒(SABC-POD)(小鼠IgG)说明书
规格:1盒
品牌:百奥莱博
编号:ZN1828
产地:国产|进口
适用一抗为小鼠 IgG,标本为培养细胞或冰冻切片的免疫组化
产品规格:1KIT
保存条件:4℃可保存一年,应避免冷冻。
工作原理:
SABC 是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素对生物素分子有极高的亲和力,等电点 pI=6.0~6.5,对组织和细胞的非特异吸附很低。
根据研究,大量的过氧化物酶可以保证 SABC 具有很高的敏感性。所以 SABC 兼具高敏感性,低背景和操作简便的优点。
冰冻切片和培养细胞做免疫组化时,由于内源性抗体的抗原性完好保存,一般免疫组化试剂盒就会碰到严重的背景染色问题,尤其是丙*(代"酮")固定的标本。本试剂盒所用的二抗是生物素标记的抗小鼠 IgG,具有高度的特异性,不和小鼠以外任何抗体起反应,所以不会因二抗引起背景染色。此外,本试剂盒也能用于小鼠标本石蜡切片的免疫组化,背景染色优于普通试剂盒。
试剂盒内容:
1.5%BSA 封闭液 6ml/12ml
2.生物素标记抗小鼠 IgG 6ml/12ml
3.SABC 6ml/12ml
冰冻切片染色步骤:
1.取出切片,浸于 PBS 中复温 30分钟。
2.灭活。30%H2O2 1 份+纯甲醇 50 份混合,室温浸泡 10分钟,以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水洗1-2次。
3.根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
4.封闭。5%BSA 封闭液 37℃孵育30分钟,甩干,勿洗。
5.滴加一抗(小鼠 IgG),37℃孵育1-2 小时或 4℃过夜。PBS 冲洗,5分钟×3次。
6.滴加生物素标记抗小鼠 IgG,37℃孵育30分钟。PBS 冲洗,5分钟×3次。
7.滴加 SABC,37℃孵育30分钟。PBS 冲洗,5分钟×3次。
8.显色液显色,镜下控制反应时间。显色剂可选 DAB或 AEC。自来水充分冲洗。
9.根据需要进行苏木素复染,染色时间为0.5-2分钟。脱水,透明。
10.选用中性树胶,水溶性封片剂或其他适当的封片剂封片。
建议:
1.对于 AP(碱性磷酸酶)显色系统,请用不含磷酸根的缓冲液洗涤,如 TBS 缓冲液。
2.热修复可选用枸橼酸盐缓冲液、EDTA 抗原修复液、PBS 缓冲液、TBS 缓冲液等作为抗原修复液。
3.酶修复可选用复合修复液、抗原修复液Ⅰ(与热修复配合使用)、胰蛋白酶、胃蛋白酶消化组织。
北京即用型免疫组化试剂盒(SABC-POD)(小鼠IgG)说明书正在火爆热销,除此之外,为您推荐下别热销产品:
·人BID重组蛋白
编号:ZN1570
规格:100ng
来源:大肠杆菌
特异性:人
应用:WB 阳性对照
形态:冻干粉
纯度:>98%,RP-HPLC&SDS-PAGE
保存条件:-20℃保存 1 年以上,避免反复冻融。
·PSCA mRNA原位杂交试剂盒
编号:ZN1188
规格:100T
基本信息:
保存条件:4℃保存一年
工作量:100张切片。
有效期:一年。
适用种属:hμman
标记方式:3’—尾段标记
试剂盒中内容:
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.PSCA mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂:
原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一.培养细胞和冰冻切片
准备工作:
固定液:4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛"):37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察:
PSCA的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项:
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
北京即用型免疫组化试剂盒(SABC-POD)(小鼠IgG)说明书关键词:百奥莱博,即用型免疫组化试剂盒(SABC-POD)(小鼠IgG),ZN1828
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北京即用型免疫组化试剂盒(SABC-POD)(小鼠IgG)说明书关键词:百奥莱博,即用型免疫组化试剂盒(SABC-POD)(小鼠IgG),ZN1828
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