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- 库存:
289
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
4℃
- 规格:
100ml
特别提示:包括Western封闭液(尼龙膜)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:Western封闭液(尼龙膜)
产品货号:GL1542
产品规格:100ml
用途:
用于Western时转移了蛋白样品的尼龙膜的封闭
注意事项:
主要由TBS、封闭剂、防腐剂、antifoam A等组成,一般每张膜封闭需要5-10ml。
储存条件:4℃,3个月
除了Western封闭液(尼龙膜),,我公司还供应以下相关产品:
名称:Western一抗二抗清除剂(酸性)
货号:YT074
规格:250ml
本品用于Western中转移了蛋白的膜的重复利用。在Western中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后,有时还需要检测tubulin、actin等表达量相对稳定的蛋白作为参照,或检测其它蛋白进行比较。通过使用一抗二抗去除液,充分去除一抗二抗,可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一个SDS-PAGE胶相比,不仅省时省力,而且可以消除重新上样而带来的误差,使可比性更强。
使用Western一抗二抗去除液多次重复使用同一张膜,会导致蛋白信号的减弱。但是,本Western一抗二抗去除液,经过多个抗体的检测试验,通常可以重复利用膜3-5次。使用本试剂只需大约40-80分钟即可实现蛋白膜的重复使用,然后可以进行封闭等后续的Western操作。
百奥莱博的不同的Western一抗二抗去除液主要在去除结合的一抗二抗的原理方面略有不同。分别依靠去垢剂、酸性、碱性、还原剂、螯合剂、盐浓度以及一些特殊试剂等的不同组合来解除一抗二抗的结合,同时又不会导致转移到膜上的蛋白的损失。
抗体清除剂选型表:
| 产品编号 | YT071 | YT072 | YT073 | YT074 |
| 产品名称 | Western一抗二抗清除剂(强碱性) | Western一抗二抗清除剂(弱碱性) | Western一抗二抗清除剂(中性) | Western一抗二抗清除剂(酸性) |
| 产品包装 | 250ml | 250ml | 250ml | 250ml |
| pH | 强碱性 | 弱碱性 | 中性 | 酸性 |
| 对于膜上蛋白的保留效果 | 好 | 好 | 好 | 好 |
| 对于一抗二抗的去除效果 | 好 | 好 | 好 | 好 |
| 去除一抗二抗所需时间 | 15-20分钟 | 20-30分钟 | 20-30分钟 | 40-80分钟 |
| 适用膜的类型 | PVDF和NC | PVDF和NC | 仅PVDF | PVDF和NC |
| 腐蚀性 | 强 | 弱 | 无 | 弱 |
用于普通的Western检测时蛋白膜上一抗二抗的去除可以任选一种去除液。如果是NC膜,即硝酸纤维素膜时,不宜选用YT071N。从时间角度考虑,强碱性、弱碱性和中性的去除液所需的时间都比较短,可以优先考虑。从价格因素考虑,强碱性的去除液性价比最高。从安全性考虑,中性的去除液由于没有腐蚀性而表现出更高的安全性。弱碱性和弱酸性一抗二抗去除液的安全性次之。但只要正确操作,并进行适当防护,使用强碱性的一抗二抗去除液也是完全可行的。
对于特定的抗原和抗体,很难说哪一种Western一抗二抗去除液的效果最好。在遇到一抗二抗去除效果欠佳时,可以考虑适当延长一抗二抗去除液的孵育时间,同时确保孵育时的温度不低于20℃。温度过低时一抗二抗的去除效果会下降。同时也可以考虑尝试其它的一抗二抗去除液,以摸索出最佳的适合您实验条件的Western一抗二抗去除液。
注意事项:
1. 使用辣根过氧化物酶(HRP),任何一次封闭(blocking)都应当使用5%脱脂牛奶,如果使用碱性磷酸酯酶,任何一次封闭都应当使用酪蛋白(casein)。
2. 为取得最佳效果,推荐使用PVDF膜。但硝酸纤维素膜也可以使用本Western一抗二抗去除液。
3. 使用化学发光试剂进行的Western检测适用本试剂。使用非化学发光试剂进行的Western检测,例如DAB,NBT/BCIP,不适用于本试剂。
4. 本Western一抗二抗去除液有轻微腐蚀性,使用时请注意防护。
储存条件:室温,有效期一年。
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文献和实验样本准备 蛋白提取 所需仪器:匀浆器、RIPA 裂解液、PMSF(蛋白酶抑制剂)、磷酸酶抑制剂、剪刀、镊子,消毒酒精棉、PBS、移液器、离心机。 裂解液配制——RIPA 裂解液:PMSF=100:1。 1) 组织处理:首先用酒精棉消毒剪刀和镊子,取适量的组织于匀浆器中,用剪刀剪碎加适量的裂解液冰水中匀浆 1-4 min。匀浆结束后吸取溶液于 EP 管中保存备用。(含血液较多的组织可先用 PBS 清洗后再匀浆) 2) 细胞处理: A、 贴壁细胞处理:去掉培养基用 PBS 清洗后加入适量的裂解
llh刘丽华 各位好:我做了1个多月western blot了,内参跑得还可以,但是目的蛋白总是跑不好,今天跑出来非特异性条带很清楚,而目的条带却很淡,不知是什么原因!前一次也是这种情况,我就延长封闭时间至2h,一抗1:700,二抗1:5000,请各位高手帮忙分析一下吧!下面是我的图片,最下面,模糊的一条(靠图片中间的一条)是我的目的条带! coffeeshine 如果非特异带很清楚,延长封闭时间没作用
xylish1 菜鸟一枚,目前要做HER-2(膜蛋白,185KD)western blot ,求教各位,一抗哪个公司的好?使用时抗体浓度,转膜时间及注意事项,多谢! zhe992000 搭车求助,我想验证肿瘤组织中透明质酸(hyaluronan)的表达水平,这是一个糖蛋白,主要在细胞外基质中表达。在文献上一般是通过透明质酸合成酶的水平 或者透明质酸水解酶的水平来间接判断透明质酸的表达水平,我想直接测定透明质酸的表达量,不知
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