MEX3C mRNA原位杂交试剂盒说明书

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")MEX3C mRNA原位杂交试剂盒说明书，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：MEX3C mRNA原位杂交试剂盒说明书
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：100T
编号：ZN0895
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：hμman
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.MEX3C mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
MEX3C的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

欲了解更多MEX3C mRNA原位杂交试剂盒说明书的品牌、产地、价格及说明书等产品信息，请致电北京百奥莱博科技有限公司，我们将竭诚为您服务，另外，以下产品正在火爆促销:
BL1099 原位细胞凋亡试剂盒(原装50T，分成10T)roche、分装
F030706 BIOTIN标记兔抗牛酪蛋白抗体 Rabbit Anti-casein*BIOTIN
Acr-Bis(40%:2%)   500ml
蜜二糖 L(+)-Tartaric acid 585-99-9
C1301 豚鼠血清(无菌过滤)
DNA Ladder plus(100bp～10kb) 
藻类膜蛋白提取试剂盒   50T|100T
BL0899 FITC标记羊抗兔IgG抗体
ARB11454 人氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)ELISA检测服务 Human oxidized lowdensity lipoprotein antibody,olab ELISA KIT
A8015-18 小鼠血清 100ml|500ml
L-酪*酸二*盐 Norfloxacin 69847-45-6
ARB11768 人腺相关病毒载体(AAV)酶免分析 Human adeno-associated virus,aav ELISA KIT
HC0121 尼龙膜(0.45um)
PY04-024  1%亚碲酸*(*)溶液  2mg/支×10支  每支添加于00ml亚碲酸*(*)肉汤培养基基础，用于金黄色葡萄球菌增菌培养
固红TR半*化锌盐 Ruthenium(III) chloride 89453-69-0
BTN130835 低熔点琼脂糖 Low Melting Agarose
MEX3C mRNA原位杂交试剂盒说明书关键词：ZN0895,百奥莱博,MEX3C mRNA原位杂交试剂盒

BTN130996 Cy5-dCTP溶液 Cy5-dCTP Solution
BTN131105 酪蛋白封堵液 Casein Blocking Solution
ZCQX02 兔全血 500ml
Caspase 8 活性检测试剂盒(比色法)   50T|100T
ARB12376 大鼠质细胞源性神经营养因子(GDNF)含量检测 Rat glial cell line-derived neurotrophic factor,gdnf ELISA KIT
BTN81205 一站式Tricine-SDS-PAGE套装 One-Stop Tricine-SDS-PAGE Pack
DP440 RNAlock血液稳定剂
ARB13345 牛β-羟基丁酸(Bhb)Elisa定量检测 
23491-45-4 Bis Benzimide Hoechst NO33258 荧光染料
F030308 胶体金标记兔抗人血清白蛋白抗体 Rabbit Anti-HSA*GOLD
E0302 抗凝绵羊血(无菌 袋装)
Acr-Bis粉剂(40%,19:1)   1L
2-碘丙*(代"烷") Phenacetin 75-30-*(代"9")
ARB12426 大鼠胃动素(MTL)Elisa分析 Rat motilin,mtl ELISA KIT
植物核蛋白提取试剂盒 Plant nuclear protein extraction kit  50T|100T
ARB10728 人红细胞生成素抗体(EPO)酶联免疫定量检测 Human erythropoietin,epo ELISA KIT
L-胱*酸盐*(代"酸")盐 Doxycycline HCl 34760-60-6
H1001 猪血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
ARB13877 猪白介素4(IL-4)ELISA代测服务 Porcine interleukin 4,IL-4 ELISA KIT
BTN70601 粪便DNAOUT Stool DNAOUT
DP214 Universal DNA 纯化回收试剂盒
ARB13607 兔子肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)ELISA检测服务 Rabbit tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 3,traIL-r3 ELISA KIT
MEX3C mRNA原位杂交试剂盒说明书关键词：ZN0895,百奥莱博,MEX3C mRNA原位杂交试剂盒

疏水硅烷 Xylene blue
E0613 抗凝裂解驴血(无菌)
ARB13868 猪白介素12(IL-12/P40)酶联免疫定量检测 Porcine interleukin 12,IL-12/p40 ELISA KIT
BL1045 营养琼脂
ARB12283 大鼠抑瘤素M(OSM)含量检测 Rat oncostatin-m,osm ELISA KIT
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(PNP微板法)   100T
84650-60-2 Tea Polyphenols 茶多酚
HC0336 12道道雷勃彩色移液器(全彩)
PY02-097  沙氏琼脂培养基  250克  
维多利亚蓝弹力纤维染色液   4×50ml
BTN81203 SDS-PAGE电泳液 SDS-PAGE Running Buffer
3,4,5-三甲氧基肉桂酸 SYBR Green 1 90-50-6
3-硝基*(代"*")二甲*(代"酸") L-Homoarginine hydrochloride 603-11-2
BTN120684 噻孢霉素溶液 Cefotaxime Solution
CYB161012 兔IgG(液体-pH7.2PBS)
ARB12997 小鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)酶免分析 Mouse anti-thyroid-peroxidase antibody,tpo-ab ELISA KIT
DP422 DNA RNA共提试剂盒
BTN120720 柱式冻存血液DNAOUT Column Frozen Blood DNAOUT

我公司正在火爆促销基因结构和功能系列产品，欢迎您的垂询选购MEX3C mRNA原位杂交试剂盒说明书。