CD82 mRNA原位杂交试剂盒 基因结构和功能

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北京百奥莱博供应的CD82 mRNA原位杂交试剂盒 基因结构和功能用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多CD82 mRNA原位杂交试剂盒等基因结构和功能产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：CD82 mRNA原位杂交试剂盒 基因结构和功能
品牌：百奥莱博
规格：100T
编号：ZN0258
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：hμman,rat,mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.CD82 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
CD82的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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·人SERPINA重组蛋白
编号：ZN1709
规格：100ng
来源：大肠杆菌
特异性：人
应用：WB 阳性对照
形态：冻干粉
纯度：>98%，RP-HPLC&SDS-PAGE
保存条件：-20℃保存 1 年以上，避免反复冻融。

·Somatostatin mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN1298
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：hμman,rat,mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.Somatostatin mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
Somatostatin的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。


CD82 mRNA原位杂交试剂盒 基因结构和功能关键词：CD82 mRNA原位杂交试剂盒,ZN0258,百奥莱博

PY01-185  荧光素  ind  25克  
ARB11304 人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3(MAPKAPK3)elisa检测 Human mitogen-activated protein kinase-activated protein kinase 3,mapkapk3 ELISA KIT
人尿微量白蛋白(m-Alb)检测试剂盒(透射微板法)   100T
ARB12101 大鼠甘丙肽/甘丙素(GAL)elisa检测操作说明书 Rat galanin,gal ELISA KIT
*甲*(代"酸")酐 Thymol Blue sodiu*(代"m") salt 93-97-0
PY04-048  头孢磺啶  0.5 mg/支×10支  每支添加于100ml MUGal(4-甲基伞形酮-β-半乳糖苷)肉汤基础培养基中 ，用于食品、饮料和饮用水的大肠菌群快速检验和计数
DR0301 多功能DNA纯化回收试剂盒
ARB13897 猪血小板活化因子(PAF)Elisa分析 Porcine platelet activating factor,paf ELISA KIT
ARB14006 鹿红细胞膜蛋白(EMP)血清中含量检测 Deer erythrocyte membrane protein,emp ELISA KIT
苏丹Ⅲ酒精饱和溶液   100ml
ARB12162 大鼠白介素27(IL-27)elisa测定使用说明书 Rat interleukin 27,IL-27 ELISA KIT
ARB10564 人过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPAR-γ)ELISA代测服务 Human peroxisome prolifeRator-activated receptor γ,ppar-γ ELISA KIT
F030812 BIOTIN标记山羊抗兔IgG抗体 Goat Anti-Rabbit IgG*BIOTIN
N-乙酰-L-酪*酸乙酯 D-Theronine 36546-50-6
BL0940 生物素化人IgG抗体
N-三(羟甲基)甲基-2-*基乙磺酸 PBS(Phosphate buffer saline)  powdered 7365-44-8
BL0840 羊抗人C3纯化抗体
SJ0820 *百里香酚蓝
4-甲氧基偶氮* Cresol Red sodiu*(代"m") salt 2396-60-3
糖原 Sodium diethyldithiocarbamate trihydrate 9005-79-2
BTN131223 Zenker固定液 Zenker Solution
CD82 mRNA原位杂交试剂盒 基因结构和功能关键词：CD82 mRNA原位杂交试剂盒,ZN0258,百奥莱博


·细胞凋亡检测试剂盒III(FITC)
编号：ZN1526
规格：20T
保存条件：-20℃冰冻保存一年。
工作原理：
在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡，其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚，时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活，细胞自身的染色质或 DNA 被切割，出现单链或双链缺口，并产生与 DNA 断点数目相同的3’-OH 末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以将地高*(代"辛")标记的dUTP(DIG-dUTP)标记至 3’-OH 末端，DIG-dUTP 结合在 DNA 断点部位，可以通过生物标记的抗地高*(代"辛")抗体(Anti-DIG-Biotin)反应后，再结合链酶亲和素-荧光素 FITC(SABC-FITC)。FITC 在 490-495nm 激化，在 520-530nm 发射荧光，呈黄绿色。凋亡的细包核呈黄绿色，从而可以在显微镜下观察到着色的凋亡细胞。
试剂盒内容：
1．标记缓冲液(Labeling Buffer)1ml
2．末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)20μl
3．DIG-dUTP(×20)20μl
4．封闭液(Blocking Reagent)4ml
5．生物素化抗地高*(代"辛")抗体(× 100)20μl
6．SABC-FITC(× 100)20μl
7．Proteinase K(×200)50μl
8．抗体稀释液 4ml
阳性对照片2张
用户自备试剂：
1．多聚赖*酸或APES。
2．0.01M TBS,PH7.5(配法:1L 双蒸馏水中加入 8.5 克*化*,1.2 克 Tris和 0.45—0.5ml 纯乙酸。)
3．DAPI 染色液
4．水溶性封片剂或抗荧光衰减封片剂。
操作步骤：
1．样品处理
(1)玻片预先用多聚赖*酸或 APES 进行处理。
(2)细胞涂片和冰冻切片：最重要的是及时固定。用 4%多聚甲醛/0.01M PBS(PH7.0---7.6)室温下固定 30—60分钟。0.01M PBS洗2分钟×2次。蒸馏水洗涤 2分钟×2次。
(3)组织：有条件时应及时固定。常规 4%多聚甲醛/0.01M PBS(PH7.0---7.6)或 10%中性缓冲福尔马林固定 4 小时以上，石蜡包埋。切片常规脱蜡入水(脱蜡务必干净)。
2．标本片加 0.01M TBS 1:200 新鲜稀释 Proteinase K 37℃消化 1—15分钟,0.01M TBS洗2分钟×3次。(细胞涂片和冰冻切片一般不消化或消化 10—60秒钟。新鲜石蜡切片消化 5-10分钟。陈旧石蜡切片消化 10-15分钟)。
3．标本片加标记缓冲液(Labeling Buffer)20μl/片,以保持切片湿润。按每张切片取 TdT和 DIG-d-UTP 各 1μl，加入 18μl标记缓冲液中，混匀。甩去切片上多余液体后加标记液，20μl/片。置样品于湿盒中，37℃标记2 小时。
4．0.01M TBS洗2分钟×3次。
5．加封闭液 50μl/片，室温 30分钟，甩掉封闭液，不洗。
6．用抗体稀释液 1：100 稀释生物素化抗地高*(代"辛")抗体：(取1ml抗体稀释液加生物素化抗地高*(代"辛")抗体10μl)，混匀后 50μl/片加至标本片上。置样品于湿盒中，37℃反应30分钟。
0.01M TBS洗2分钟×3次。
7．用抗体稀释液 1：100 稀释 SABC：取 1ml 抗体稀释液加 SABC 10μl，混匀后 50μl/片加至切片。37℃反应 30分钟。0.01M TBS洗5分钟×4次。
8．必要时可用DAPI染色液轻度复染，蒸馏水洗。抗荧光衰减封片剂封片(可用甘油代替)。荧光显微镜观察。
结果判定：
细胞核中有黄绿色颗粒者为阳性细胞，即凋亡的细胞。
注意事项：
1．试剂盒严格-20℃存放。
2．初用时如试管底部无可见的试剂，在离心机离心5分钟，使试剂沉至管底。
3．检测过程中切勿使样品干涸。

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