- ￥3091
- roche
- 罗氏11277073910
- 2025年11月05日
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- 英文名：
DIG RNA Labeling Mix, 10x conc.
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- 供应商：
嵘崴达
- 保存条件：
见产品外包装
- 规格：
40 μL
DIG RNA标记混合物
sufficient for 20 reactions, solution
别名:
核酸标记
一般描述
标记效率：来自1μg 线性模板DNA的约10μg的全长DIG标记RNA被转录。
检测时间：135分钟
样本材料
线性化质粒DNA：
待转录的DNA将会被克隆至含有SP6，T7或T3 RNA聚合酶启动子并相邻于多接头的合适转录载体的多接头位点。对于“流失”转录本的合成，质粒是通过限制性酶进行线性化的。限制性酶生成的5′-突出应当被使用；3′ 突出应当被避免。线性化的模板DNA应当通过酚氯仿抽提及乙醇沉淀进行纯化，以避免RNase的污染。对于′run around′转录环状质粒DNA会被使用。
PCR产物：
含有RNA聚合酶启动子序列的PCR片段也可被用作转录的模板。推荐在转录之前对PCR片段使用HIghPure柱进行纯化。
我们致力于为您提供更环保的替代产品，以符合“绿色化学的12项原则”的一项或多项原则要求。该产品为一种安全的化学品。 DIG系统是灵敏且具有成本效益的方案，可替代放射性标记和放射法检测核酸。有许多已发表论文证明了DIG系统的通用性，因此，使用放射性标记不再是标记用于杂交的DNA的唯一选择。
通过这种方法，特定长度的DIG标记单链RNA探针通过体外转录被生成。在标准条件下，DIG-11-UTP通过SP6、T7和T3 RNA聚合酶以大约每20到25个核苷酸的间隔插入转录产物中。DIG RNA标记混合物专门设计用于优化转录缓冲液的SP6, T7和T3 RNA聚合酶。
便捷的核苷酸混合物用于基于DIG-11-UTP的RNA标记
内含物
10x 溶液带有：10 mM ATP, CTP, GTP (各), 6.5 mM UTP, 3.5 mM DIG-11-UTP.
特异性
热灭活：添加 2 μl 0.2 M EDTA (pH 8.0) 终止反应。
应用
利用SP6，T7及T3 RNA聚合酶通过体外转录而使用di高辛-11-UTP进行RNA标记。DIG标记RNA已用于多种杂交技术：
- Northern blots
- Southern blots
- 斑点印迹
- 菌斑或克隆提升
- RNase保护实验
- 染色体, 细胞, 及组织切片原位
特点和优势
DIG RNA标记混合物专门设计用于来自Roche并配以优化的转录缓冲液的SP6, T7和T3 RNA聚合酶。
| 11277073910 | DIG RNA Labeling Mixture, 10x | 40 µl (20 reactions) |
| 3353591910 | DIG Gel Shift Kit, 2nd generat | 1 kit |
| 11004794001 | T4 DNA Polymerase, 500 U | 500 U |
| 11487671001 | RNA Polymerase, SP6, 5000 u | 5,000 U |
| 11573179910 | DIG-11-dUTP,Alkali-labil, Sol | 125 nmol (125 µl) |
| 10633542001 | Polynucleotide Kinase, 1000 U | 1,000 U |
| 11209299001 | Nylon Membranes, 20 sheets | 20 sheets (10 x 15 cm) |
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文献和实验1. Add the following to a sterile microfuge tube on ice: -1 ug linearized plasmid DNA. -2 ul Dig RNA Labeling Mix, 10X concentrate -2 ul 10X transcription buffer -1-2 ul RNase inhibitor (DNase free) -add DEPC treated H2O up to 18 ul -2 ul RNA
如果您需要制备RNA探针的话，推荐您使用Northern Starter Kit。该试剂盒以线性的DNA为模板，通过SP6, T7或是T3 RNA聚合酶的作用将DIG-11-UTP掺入到转录的RNA中，借助化学发光底物CDP-Star检测。另一个产品DIG RNA Labeling Kit也可用于RNA探针的标记。 末端标记寡核苷酸Oligonucleotide
Digoxigenin-UTP RNA labeling Digoxigenin-UTP RNA labeling 1. Add the following to a sterile microfuge tube on ice: -1 ug linearized plasmid DNA. -2 ul Dig RNA Labeling Mix, 10X concentrate -2 ul 10X transcription buffer -1-2 ul
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