尿嘧啶-DNA 糖基化酶/Uracil-DNA Glycos

尿嘧啶-DNA 糖基化酶

Uracil-DNA Glycosylase

recombinant from E. coli K 12

General description

尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UNG）含有在原核生物和真核生物中发现的同名酶的高活性重组形式。它水解单链或双链 DNA 中的尿嘧啶-糖苷键，切除尿嘧啶，并在 DNA 中产生碱敏感的脱碱基位点。核酸内切酶、加热或碱处理可水解这些脱碱基位点。根据 DNA 的制备方式，尿嘧啶-DNA 糖基化酶可用于实现一般的、位点特异性的或链特异性的 U-DNA 切割。

Specificity

• 尿嘧啶-DNA 糖基化酶水解单链和双链 DNA 中 U-DNA 位点的尿嘧啶糖苷键，切除尿嘧啶，并在 DNA 中形成碱敏感的脱碱基位点。
• 该酶对单链 DNA 的活性高于双链 DNA。
• 对小 U-DNA 寡核苷酸和 dUMP 也具有活性（Duncan，未发表的研究结果）。
• 尿嘧啶-DNA 糖基化酶对 RNA 和天然的无尿嘧啶 DNA 无活性。

热灭活：95℃，10 分钟
尿嘧啶-DNA 糖基化酶在 95℃ 温育 30 分钟后保持部分活性（<10%）。

Application

尿嘧啶-DNA 糖基化酶可用于在已掺入脱氧尿苷酸残基的任何位点切割 DNA。U-DNA 可以通过体外方法（如 PCR）制备。根据 DNA 的制备方式，尿嘧啶-DNA 糖基化酶可以实现一般的、位点特异性的或链特异性切割。因此，尿嘧啶-DNA 糖基化酶可以帮助您：• 预防 PCR 中的携带污染
• 提高定点突变实验的效率
• 标记寡核苷酸探针

Quality

通过在扩增反应之前，添加约 10⁵dU（含有模板） 来检测携带预防活性。UNG 处理后，检测不到扩增产物。该酶不含任何污染的外切或内切核酸酶，并且经检测不含 RNA 酶。

Unit Definition

一个单位的尿嘧啶-DNA 糖基化酶是在 +37℃ 下，在 60 分钟内能够完全降解 1 μg 纯化的含有尿嘧啶的单链 DNA（噬菌体 M13，生长在 大肠杆菌 CJ 236 dut-ung- 中）所需的酶量。
一个 Lindahl 单位的酶是指在 +37°C 下，在 1 分钟内能释放 1 μmol 尿嘧啶所需的酶量。根据我们的单位定义，一个 Lindahl 单位对应于 520,000 U。