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- 英文名:
Collagenase D
- 规格:
2.5 G

胶原酶D
from Clostridium histolyticum
别名:
collagenase
一般描述
胶原酶D是通过过滤、硫酸铵沉淀、透析和冻干而从溶组织梭菌的培养物中制备的。
特异性
胶原酶可降解天然胶原蛋白。梭菌蛋白酶、胰蛋白酶样酶和中性蛋白酶也会降解其他蛋白质。
应用
来自溶组织梭菌的胶原酶被广泛用于解聚多种类型的组织(如,肺、心脏、肌肉、骨骼、脂肪组织、肝脏、肾脏、软骨、乳腺、胎盘、血管、脑、肿瘤),以及用于建立原代细胞培养系统的单细胞悬浮液的制备。当细胞表面蛋白的功能性和完整性很重要时,推荐使用胶原酶D。来自Roche的
梭菌胶原酶已用于从多种类型的组织中进行细胞的制备,如肝细胞、脂肪细胞、胰岛、上皮细胞、肌肉细胞、内皮细胞等。然而,应根据经验确定每个批次的酶对破坏特定组织的适用性。
特点和优势
内含物
冻干粉,未灭菌
单位定义
来自Roche的胶原酶以Wünsch单位(在+25°C下每分钟用Wünsch底物形成μmol的产物)进行测定。
通常,胶原酶活性是以Mandl单位(在+37℃下5小时内从胶原释放的1 μmol亮氨酸)给出的。
不幸的是,两个活性单位之间没有统一的转换因子,因为Mandl单位部分取决于胶原酶制剂中污染性蛋白酶的浓度,而这是一个不确定的变量。较纯的胶原酶制剂相对于粗制剂在Mandl单位中实际上具有更低的比活性。梭菌制剂通常具有约1:1800的转换因子(如某个特定批次的梭菌胶原酶所含有的约0.15 Wünsch U/mg和250 Mandl U/mg)。
外形
冻干粉,未灭菌。
上海嵘崴达实业有限公司,专业经营生命科学领域的科研试剂、仪器和实验室消耗品,
致力于向国内生命科学研究人员提供合格产品和完善服务。
主要经营的试剂品牌:
Roche试剂,部分常用现货,周三定货,2-3周到货。
GE试剂,耗材,部分常用现货,周二,周五定货,3周左右。
SIGMA试剂,周一,五定货,3周左右到货。
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Peprotech试剂,部分常用现货,周三定货,2-3周到货。
罗氏原料,请来电来邮咨询。
BD培养基货期八周左右,部分现货。
MCE激动剂,ACROS、ALFA、阿拉丁等生化试剂现货定购。
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文献和实验选取了C57BL/6J小鼠及多种基因修饰小鼠(如Cd19-Cre、CD169-DTR等),所有实验均严格遵循筑波大学动物伦理委员会的指南进行。 在脾脏巨噬细胞的分离环节,研究团队对比了传统的机械研磨法与酶解法。 具体操作为: 先对离体脾脏进行灌注清洗并剪碎,随后使用含有胶原酶D、DNase I和分散酶I的混合酶液在37℃下消化30分钟。细胞悬液经过滤网过滤、红细胞裂解以及磁珠阴性分选去除非淋巴样细胞后,利用流式细胞术(FACS)进行检测与分选。为了验证该方法的特异性,研究还使用
辅助方案: 胶原酶消化制备脾脏细胞悬液 实验材料: 1. 4000U/ml胶原酶D,融化后置于冰上 2. HBSS,已灭菌,含Ca+ 、Mg2+ (购置于Life Technologies) 3. 小鼠脾脏 4. 皮下注射针,22G×11/2 in内径(Becton Dickinson) 5. 10ml、5ml一次性注射器(如Becton
消化液:AdvancedDMEM/F12+2.5mg/mL胶原酶D+0.1mg/mLDNaseI。 ②振荡孵育消化;消化结束后,70 μm细胞筛过滤,冰DMEM洗涤。 ③离心得到细胞沉淀。 关键细节:沉淀含有大量红细胞、细胞碎片,本方案不做细胞计数,红细胞死碎片不具备类器官形成能力。 2.基质胶包埋接种 ①细胞沉淀重悬于Geltrex基质胶;24孔板,每孔50 μL基质胶‑细胞混合液,做成胶滴(dome)。接种时胶滴内细胞密度约20%。 ②37℃孵箱30 min,使Geltrex完全凝固。
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