- ￥5492
- roche
- 罗氏5091284001
- 2025年11月14日
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Transcriptor High Fidelity cDNA Synthesis Kit
- 规格：
100 REACTIONS
Transcriptor高保真cDNA合成试剂盒
sufficient for 50 reactions, sufficient for 100 reactions, sufficient for 200 reactions, suitable for RT-PCR, suitable for RT-qPCR
别名:
RT-PCR, cDNA sysnthesis
一般描述
cDNA合成过程中常用的逆转录病毒逆转录酶与其他核酸分析实验技术使用的DNA聚合酶相比，往往具有更高的错误率。这会造成明显的碱基交换或移码，而这些错误会在后继PCR反应中被进一步放大。具有校正功能的高保真PCR酶已拥有很多年的历史；本次 Roche推出的全新高准确性逆转录酶能够进一步合成高产量全长cDNA。
高突变率是逆转录病毒复制的特点。该特点起源于病毒编码逆转录酶的基因组复制机制，该机制可以将病毒的基因组RNA转变为双链DNA。在这个逆转录过程中，发生复制错误的概率很高。一种目前可被接受的解释是逆转录酶缺少3'-5'外切酶活性，导致这种错误的发生。逆转录酶天然存在的高错误率使其无法在多种应用中表现出最佳性能。
Transcriptor高保真逆转录酶混合物，用于最长达到14 kb的RNA的高保真两步法RT-PCR。
Transcriptor高保真cDNA合成试剂盒的核心成分是Transcriptor高保真逆转录酶，该酶是一种混合物，含有经过基因重组的逆转录酶及具有校正调节功能的酶。两种酶的协同作用使其混合酶在逆转录RNA模板时可以获得比其他常用转录酶高7倍的保真度。
Transcriptor高保真逆转录酶混合物能有效逆转录长达14 kb的模板。该混合酶具有高热稳定性以及特别优化的缓冲体系，使整个逆转录过程可以在高达55°C的温度下进行。因此，无需添加任何附加成分，就可以解决具有复杂二级结构的高GC含量模板的逆转录问题，而这些附加成分可能会影响逆转录反应的准确性。
混合酶中的重组逆转录酶来自于大肠杆菌（E. coli）。该酶具有依赖于RNA的DNA聚合酶活性、依赖于DNA的DNA聚合酶活性、解旋活性及可降解RNA:DNA杂合体中RNA的RNase H酶活性。因此，在逆转录后，不再需要耗时的RNase H孵育步骤，从而缩短了反应时间并降低了实验成本。
特点和优势
提高逆转录反应的准确性。
- 优化的混合酶提供比其他常用逆转录酶高7倍的保真度。
- 借助Genome Sequencer 20系统对几百万个碱基序列进行测定，提供真实可靠的保真数据。
将准确度与高灵敏度、高产量和全长转录子相结合。
- 使用该试剂盒包含的锚定oligo (dT)18 引物可获得最长达到14 kb的全长转录子。
- 出色的产量。
- 可检测低拷贝模板，最少可逆转录10 pg模板RNA。
- 可转录多种模板，甚至可在高达55°C的转录温度下转录最复杂的模板（如：具有复杂二级结构的富含GC的RNA）。
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文献和实验M-MLV第一链cDNA合成试剂盒-技术手册一、 试剂盒组成 Components SK2027 SK2028 5×M-MLV Reaction Buffer 100µl
释放酶活；一类是抗体法修饰的热启动酶，如 Champagne Taq ，预变性 95℃30s 即可释放酶活。使用时注意预变性时间，方能获得满意的扩增效果。 2. 选择 Lamp 扩增长片段 大于 5Kb 的长片段又该如何扩增呢？如果实验对保真度的需求不高，那么就可以使用 LAmp DNA 聚合酶。其保真度是 Taq 酶的 6 倍，可扩增超过 20Kb 的基因组、cDNA 片段，对于低拷贝、低纯度、以及不同 GC 含量的模板都具有很高的成功率。 3. 选择高保真酶快速高效扩增 如果实
过的 DNA 聚合酶增强了与模板的亲和度，其灵敏度更高，因而所需的模板量少。过低的模板量会减少 PCR 的产量，过高的模板量可能造成非特异性扩增，所以 DNA 模板量的优化尤为重要。 除了 gDNA、cDNA 和质粒 DNA，PCR 产物也可作为模板以获得更高的产量。但 PCR 产物中存在的残余反应组分（如引物、dNTP、盐和副产物）可能会影响下一次的 PCR 反应。所以推荐在下一次 PCR 前使用 PCR 产物纯化试剂盒将 PCR 产物先进行纯化。 【DNA 聚合酶】 DNA 聚合酶是PCR扩增中最关键
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