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- 百奥莱博
- WE0228-FCA
- 北京
- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
503
- 英文名：
NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)北京现货促销在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称：二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)北京现货促销
规格：24次|96次
英文名：NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent
编号：WE0228
产地：国产|进口
本试剂盒提供了构建DNA文库需要的酶预混体系及反应缓冲液，包含除接头以外的所有成分，制备的文库可用于Ion torrent PGM、Ion Proton二代测序平台的测序。和常规建库方法相比，该试剂盒将多个步骤进行了合并，省略了多个纯化步骤，因此显著降低了起始模板DNA的最少需求量，缩短了文库构建时间。另外，试剂盒采用高保真DNA聚合酶进行文库富集，无偏好的PCR扩增，扩大了序列的覆盖区域，可高效的制备用于Ion torrent二代测序平台的DNA文库。
试剂盒组成：
| 组份 | 24次 | 96次 |
| 10×End Repair Buffer | 200μl | 800μl |
| End Repair Enzyme Mix | 48μl | 192μl |
| Ligation and Nick Repair Buffer | 400μl | 2×800μl |
| T4 DNA Ligase | 48μl | 192μl |
| Bst DNA Polymerase | 48μl | 192μl |
| 2×HiFidelity PCR Mix | 600μl | 2×1.2ml |
| 10×Primer Mix(5μM each) | 150μl | 600μl |
自备仪器、试剂和耗材：
1、磁力架：建议使用Life公司磁力架。
2、DNA纯化回收试剂盒：建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)。
3、样本接头引物试剂盒。
4、无水乙醇，EB(10 mM Tris-HCl, pH 8.0)，去离子水(pH 在7.0-8.0之间)。
5、反应管：建议使用低吸附的PCR管与1.5ml离心管；枪头：建议使用高质量过滤枪头防止试剂盒、文库样本污染。
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、避免试剂盒中Buffer的反复冻融，建议首次使用时将Buffer进行分装保存。酶在使用完应尽快放回-20℃保存，
2、PCR产物因操作不当极易产生污染，导致实验结果不准确，建议将PCR反应体系配制区与PCR产物纯化区隔离，并使用专门的移液器，定期对各实验区域进行清洁。
DNA建库流程示意图：
起始材料：5ng-1μg打断的双链DNA，溶于EB(10 mM Tris-HCl pH 8.0)或去离子水中，DNA纯度要求：OD260/OD 280=1.8-2.0。
DNA末端修复反应：
1、向200μl PCR管中加入以下成分，用枪头将上述溶液轻轻混匀，瞬时离心使所有组分收集到管底。
| 试剂 | 体积 |
| 10×End Repair Buffer | 6μl |
| End Repair Enzyme Mix | 2μl |
| fragmented DNA | X(10ng～1μg) |
| RNase-Free Water | Up to 60μl |
2、将管子置入PCR仪中，热盖打开，反应程序如下：
20 min @ 25℃
10 min @ 70℃
Hold on 4℃
Adaptor 连接：
建议使用百奥莱博adaptor进行连接，也可选择使用Life、Kapa公司的adaptor，具体连接方法可参考各公司的产品使用说明书。以下为使用百奥莱博adaptor进行连接的操作步骤：
1、向上述反应液中直接加入以下试剂, 用枪头将上述试剂混匀，短暂离心，使溶液收集到管底。
| 试剂 | 体积 |
| Ligation and Nick Repair Buffer | 10μl |
| T4 DNA Ligase | 2μl |
| Bst DNA Polymerase | 2μl |
| Adaptor A | 7μl |
| Adaptor P1 | 7μl |
| RNase-Free Water | 12μl |
| Total volume | 40μl |
注意：建议Adaptor的加入量与DNA片段的摩尔比为10:1-20:1，具体Adaptor的使用浓度请参照下表。如果DNA量为10-100ng, adaptor建议使用浓度为1μM(小于260 bp)或 0.5μM(300-400 bp)。
| 插入DNA 量/反应 | 不同大小DNA 建议Adaptor 使用浓度 | |||
| 130 bp | 260 bp | 320 bp | 410 bp | |
| 1μg | 10μM | 10μM | 5μM | 5μM |
| 500ng | 5μM | 5μM | 2.5μM | 2.5μM |
| 100ng | 1μM | 1μM | 0.5μM | 0.5μM |
2、反应步骤：
15 min @ 25℃
5 min @ 65℃
Hold on 4℃
Adaptor连接DNA片段的选择性回收：
构建不同大小的DNA文库时，需进行DNA片段的选择性回收。若起始样本量低于50ng，不建议进行DNA片段选择性回收。可参考另一种方案，直接进行DNA片段的纯化。建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)进行DNA片段选择性回收。若使用除百奥莱博以外厂家的磁珠，需自行摸索最佳磁珠用量。以下操作步骤采用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒，可选择回收DNA片段长度范围为310-370bp(读长为200bp)，反应起始体积为100μl。
1、涡旋振荡MCPure 20秒，使其彻底混匀为均一溶液；
2、将100μl adaptor连接反应缓冲液转移至一新的1.5ml离心管中；
3、加入60μl混合均匀的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟；
4、短暂离心，将离心管置于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心地将上清溶液转移至新的1.5ml离心管中,并弃去磁珠；
注意：不要弃除上清。
5、向上清中加入20μl混合均匀的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温放置5分钟；
6、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心移取上清并弃除，期间避免接触结合目标DNA的磁珠；
注意：不要弃除磁珠。
7、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清；
8、重复步骤7；为彻底移除残留液体，可将离心管短暂离心后，再次移除残留液体。
9、保持离心管固定于磁力架上，室温静置5分钟，使磁珠在空气中干燥；
10、将离心管从磁力架上取下，加入25μl 10 mMTris-HCl(pH 8.0)或去离子水(自备)，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟；
11、短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中；
另一种方案：Adaptor连接DNA片段的全部回收：
1、涡旋振荡MCPure20秒，使其彻底混匀为均一溶液。
2、将adaptor连接反应液转移至一新的1.5ml离心管中。
3、加入1倍样品体积的MCPure，涡旋震荡5秒钟后，室温静置5分钟。
4、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心吸取上清并弃除，期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
注意：不要弃除磁珠。
5、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清。
6、重复步骤5。为彻底移除残留液体，可将离心管短暂离心后，再次移除残留液体。
7、保持离心管固定于磁力架上，室温静置5分钟，使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下，加入25μl EB(自备)或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟。
9、短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中。
PCR富集：
1、在PCR管中加入以下试剂并混匀：
| 试剂 | 体积 |
| 连接adaptor后的DNA片段 | 20μl |
| 2×HiFidelity PCR Mix | 25μl |
| 10×Primer Mix(5μM each) | 5μl |
| 总体积 | 50μl |
2、PCR反应条件：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 98℃ | 30s | |
| 变性 | 98℃ | 10s | 4～12个循环 |
| 退火 | 65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 30 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 5min |
注：样本量为1ug时，4-6个cycles，样本量100ng时6-8个cycles，样本量为10ng时10-12个cycles。PCR循环数可根据实验进行优化。
PCR产物的纯化：
1、涡旋振荡MCPure20秒，使其彻底混匀为均一溶液；
2、将PCR反应液转移至一新的1.5ml离心管中；
3、加入1倍样品体积的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟；
4、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)。小心移取上清并弃除，期间避免接触结合目标DNA的磁珠；
注意：不要弃除磁珠
5、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清。
6、重复步骤5；为彻底移除残留液体，可将离心管短暂离心后，再次移除残留液体。
7、保持离心管固定于磁力架上，室温静置5分钟，使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下，加入25μl EB(自备)或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟，短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中，DNA文库在-20℃保存。
储存条件：-20℃
二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)北京现货促销极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：
胰蛋白酶-EDTA溶液(含酚红) 0.05%:0.02%|0.25%:0.02% 100ml
BTN80701 TG1感受态细胞 TG1 Competent Cell
BTN100912 长效期SDS-PAGE电泳液(干粉) Stable SDS-PAGE Running Buffer
L-半胱*酸盐*(代"酸")盐一水物 1,5-Dihydroxynaphthalene 7048-04-6
肽聚糖 Dextran 27814-48-8
ARB12522 大鼠热休克蛋白90(HSP-90)Elisa定量检测 Rat heat shock protein 90,hsp-90 ELISA KIT
1,3,5-三** Maltose Phosphorylase 626-39-1
吲唑 Deoxy-Big CHAP 271-44-3
ARB12648 大鼠酪*酸激酶B(TrkB)ELISA检测服务 Rat tyrosine kinase b,trk b ELISA KIT
50-99-7 D(+)Glucose D-无水葡萄糖
F020228 兔抗绵羊IgG抗体 Rabbit Anti-Sheep IgG
BL1164 植物基因组DNA提取试剂盒
黑色素(水溶) 14.4-116kDa Protein Molecular weight Mark 8005-03-6
ARB10680 人血管舒缓激肽(BK)酶联免疫定量检测 Human bradykinin,bk ELISA KIT
ARB10284 人上皮特异性抗原(ESA)免费代测 Human epithelial specific antigen,esa ELISA KIT
D-果糖-1,6-二磷酸三* EGTA 38099-82-0
新型植物基因组DNA提取试剂盒(96孔板)
二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)北京现货促销关键词：二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台),NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent,WE0228
·高效无内毒素质粒大量提取试剂盒
编号：WE0167
英文名称：NoEndo Plasmid Maxi Kit
规格：2次|10次
本试剂盒提供一种简单快捷高效提取无内毒素质粒的新方法，在碱裂解法裂解细胞的基础上，采用独特的硅基质膜吸附技术，高效专一结合质粒DNA；同时采用特殊的缓冲液系统和除内毒素过滤器，有效去除内毒素、基因组DNA、RNA、蛋白等杂质。本试剂盒所得质粒纯度高、提取量大，特别适用于细胞转染，同时也可用于DNA测序，PCR，体外转录，内切酶消化等实验。
为什么使用本试剂盒？：内毒素是质粒提取中常见的污染物，由于真核细胞对内毒素非常敏感，因此，如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。
试剂盒组成：
| 组份 | 2次 | 10次 |
| Buffer P1 | 30ml | 125ml |
| Buffer P2 | 30ml | 125ml |
| Buffer E3 | 30ml | 125ml |
| Buffer PS | 15ml | 30ml |
| Buffer PW(浓缩液) | 10ml | 50ml |
| Endo-Free Buffer EB | 10ml | 30ml |
| RNase A(10 mg/ml) | 600μl | 2ml |
| 推柄 | 2个 | 10个 |
| 内毒素过滤器FQ | 2个 | 10个 |
| 吸附柱DQ及收集管 | 2套 | 10套 |
| 离心管(50ml) | 2个 | 10个 |
自备试剂：无水乙醇、异丙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，将吸附柱置于2～8℃可保存更长时间，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可稳定保存6个月。
2、Buffer P1 在使用前先加入RNase A(将试剂盒中提供的RNase A 全部加入)，混匀，置于2–8℃保存。使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请先检查Buffer P2 和Buffer E3是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
5、注意Buffer P2和Buffer E3含有刺激性物质，请戴手套操作，使用后应立即盖紧盖子。
6、使用Buffer PS处理过的吸附柱最好立即使用，避免放置时间过长影响使用效果。
7、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
操作步骤：
1、取150ml过夜培养的菌液，加入离心管(自备)中，12000×g离心2-3分钟收集细菌，尽量吸弃全部上清。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入12ml Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮细菌沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，使提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入12ml Buffer P2，温和地上下颠倒混匀8-10次，使菌体充分裂解，室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮，提示可能菌量过大，裂解不彻底，应减少菌体量。
4、向离心管中加入12ml Buffer E3，立即上下颠倒混匀8-10次，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5分钟。12000×g离心10分钟，将上清全部倒入除内毒素过滤器中，慢慢推动推柄(Plungers)过滤，滤液收集在干净的50ml离心管(自备)中。
注意：Buffer E3 加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
5、向滤液中加入0.3倍滤液体积的异丙醇，上下颠倒混匀。
注意：加入异丙醇过多容易导致RNA污染。
6、柱平衡：向已装入收集管中的吸附柱中加入2ml Buffer PS，12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、将步骤5中滤液与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱(已装入收集管)中。
8、6000-12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：吸附柱的最大容积为15ml，所以第7步中所得溶液分多次过柱。如果离心机转子倾角较大时，建议加入吸附柱的溶液体积不超过10ml，以防发生漏液现象。
9、向吸附柱中加入10ml Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，6000-12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液。
10、重复步骤9。
11、将吸附柱重新放回收集管中，12000×g离心5分钟，倒掉废液，将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附膜的中间部位加入1-3ml Endo-Free BufferEB，室温放置2-5分钟，12000×g离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意：
1)为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5分钟，12000×g离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。
2)质粒拷贝数较低或>10 kb时，Endo-Free Buffer EB在65－70℃水浴预热，可以增加提取效率。
储存条件：室温(15～30℃)
二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)北京现货促销关键词：二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台),NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent,WE0228
·无RNA酶水
编号：WE0217
英文名称：RNase-Free Water
规格：100ml
本品为不含RNase的水，常用于RNA的提取纯化、RT-PCR等分子生物学实验。
·口腔拭子DNA样本保存管
编号：WE0395
英文名称：RNase-Free Water
规格：200μl×10支
本产品采用医疗专用的聚*脂海绵为原材料，具有吸液性强、柔软洁净、发尘量低等优点。采样拭子头可折断，使用方便。采用的物料对微生物无毒害，能大量地增加样本的采集、释放量，增强样本送检期间的保存效果。能够常温保存口腔拭子DNA长达12个月，其获得的DNA可用来完成各种基因检测及分析实验，如qPCR、NGS、SNP分析。为运输和存储提供方便，并减低其成本。
使用方法
1、取样前清洁双手，用清水漱口1-2次，去除口腔中的食物残渣，咽尽口腔中剩余的清水。
2、撕开采样棉签外包装。
3、将棉签伸进口腔内，在内侧颊粘膜处反复擦拭20次以上，至棉头已经被唾液充分浸润(应无食物残渣等异物粘附)。
4、打开样本采集管盖，将采样后的棉签放入样本采集管内，沿手柄上的折痕折断手柄。
5、随即盖上样本采集管，完成样品取样。
北京百莱博科技有限公司专业生产基因结构和功能产品，欢迎来电咨询选购二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)北京现货促销。
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文献和实验相关实验
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LightCycler通过实时荧光PCR技术进行DNA甲基化分析
品相似。HS578T乳腺癌细胞株非常有趣，因为它的熔解曲线与非甲基化和甲基化曲线都不同。该曲线以检测区出现异质性甲基化为特征。 LightCycler® 480实时荧光PCR仪是一款非常适合进行HRM的实时荧光PCR仪器，配合使用LightCycler® 480高分辨熔解扩增试剂盒，即成为了一套执行甲基化敏感性高分辨熔解分析（MS-HRM）检测的可靠平台，允许快速高通量研究DNA甲基化。相信这个新的研究方法的推出可以有效加快表观遗传学的研究进程，做到更快、更准、更好。 参考文献 1. Bird AP
三代长读长测序数据进行完善和提升。针对前期已经开展全基因组测序，获得基因组草图的动植物、微生物等，可以结合 PacBio RS II 平台长读长 reads 进行补充，从而快速获得前期没有测得的信息及提升基因组的完整度。另外还可以针对前期没有检测获得的结构变异信息（structural-variation events）、串联重复序列信息（tandem duplication）、易位信息（Inversion）等。 3、全长转录本测序 PacBio RS II 的长读长可实现全长
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