北京一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒厂商

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒厂商由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒等核酸扩增(PCR)产品请联*(代"系")我司咨询订购。

北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应北京一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒厂商，产品信息：

类别：核酸扩增(PCR)

英文名：SuperSYBR One Step RT-qPCR Kit

产品名	产品编号	包装规格
一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒	WE0137	100次

产地：国产|进口

品牌：百奥莱博

规格：100次

英文名：SuperSYBR One Step RT-qPCR Kit

  本试剂盒是一步法Real-Time RT-qPCR专用试剂盒。所含的SYBR Green I荧光染料可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可以用于多种不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应，逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。全新高效逆转录酶RNase H活性缺失，减少了逆转录反应中RNA的降解。该酶逆转录效率高，可对少量 RNA模板进行良好的逆转录反应。与RNA亲合性高，能通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。全新高效热启动酶，在常温下酶的活性被封闭，从而有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，极大提高了荧光定量PCR反应的精确性。所包含的缓冲系统使以上两种酶同时发挥最大功效，提高效率。本产品灵敏度高，特异性高，线性范围广，对目的基因定量更准确。

 

ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。

 

不需要ROX校正的仪器:(WE0137)

Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。

需要Low ROX校正的仪器：(WE0138)

ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。

需要High ROX校正的仪器：(WE0139)

ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

 

试剂盒组成：

 

组份	WE0137-100次	WE0138-100次	WE0139-100次
2×SuperSYBR One Step Buffer	1.4ml	1.4ml	1.4ml
SuperSYBR One Step EnzymeMix	50μl	50μl	50μl
50×Low ROX	-	50μl	-
50×High ROX	-	-	50μl
RNase-Free Water	1.5ml	1.5ml	1.5ml

 

注意事项：

1、本试剂盒中的各试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。

2、本产品以RNA为模板进行一步法RT-PCR实验，在操作过程中应避免RNase污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，实验相关耗材应用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并高压灭菌30分钟后使用。

3、SuperSYBR One Step RT-qPCR Buffer中含有SYBR Green I 荧光染料，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。

4、本试剂盒中的各试剂应避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。

5、本试剂盒必须使用特异性引物，引物的选择可根据具体实验来选择，引物设计的好坏直接影响到RT-PCR反应的结果，设计引物时需考虑GC含量，引物长度，引物位置，PCR产物的二级结构等因素，建议采用专业的引物设计软件进行设计。

6、本品不能用于探针法荧光定量PCR。

 

操作步骤：

1、将RNA模板、引物、2×SuperSYBR One Step Buffer、SuperSYBR One Step EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。

2、PCR反应体系

 

 

试剂	25μl反应体系	终浓度
2×SuperSYBR One Step Buffer	12.5μl	1×
Forward Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
SuperSYBR One Step EnzymeMix	0.5μl
RNA Template	Xμl	10 pg～100ng
50×Low ROX or High ROX(optional)	0.5μl	1×
RNase-Free Water	up to 25μl

注意：

1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以终浓度0.1-0.5μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX。

 

3、涡旋震荡混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。

4、RT-qPCR反应条件(荧光定量PCR为两步法)，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为例。

 

 

步骤	温度	时间	循环数
反转录	45℃	10 min
PCR预变性	95℃	5 min
变性	95℃	10 s	30-40个循环
退火/延伸	60℃	45 s
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：

1)建议采用两步法PCR反应程序，若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考；若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增。

2)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI7500荧光定量PCR仪为参照设定。

 

RT-qPCR反应条件(荧光定量PCR为三步法)：

 

 

步骤	温度	时间	循环数
反转录	45℃	10min
PCR预变性	95℃	5min
变性	95℃	15s	30-40 个循环
退火	56℃-64℃	30s
延伸	72℃	30s
融解曲线分析	95℃	15s
	60℃	1min
	95℃	15s
	60℃	15s

注意：

1)三步法PCR扩增时，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。

2)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。

 

储存条件：-20℃，避免反复冻融

北京一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒厂商专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

关键词：WE0137,SuperSYBR One Step RT-qPCR Kit,一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒

我公司立足北京，辐射全国。随着产品战略的不断延伸，产品理念的不断完善，百奥莱博将逐步成长为一流的生化试剂供应商，并一如既往的为您提供优质的一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒和完善的售后服务，与您一起携手整合各自的优势资源，竭尽全力支持您的事业，为中国生命科学的发展贡献一份力量。

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编号	类别	名称
WE0374	二抗	罗丹明山羊抗大鼠IgG(H+L)
WE0339	一抗	抗RFP标签单克隆抗体
WE0244	核酸电泳和回收	100bp DNA Ladder
WE0390	二抗	AP标记山羊抗小鼠IgG(H+L)
WE0397	DNA纯化	游离DNA样本保存管(5ml,PET)
WE0363	HRP标记抗体	HRP标记兔抗绵羊IgG(H+L)
WE0236	工具酶	大片段Bst DNA聚合酶
WE0121	一抗	Taq酶抗体
WE0273	蛋白质研究	微量BCA蛋白定量试剂盒
WE0145	核酸扩增(PCR)	实时荧光定量PCR的预混体系(探针法)(低含量ROX校正染料)
WE0166	DNA纯化	无内毒素质粒中提试剂盒
WE0295	蛋白质研究	Western抗体稀释液
WE0336	一抗	抗His标签鼠克隆抗体
WE0194	RNA纯化	病毒RNA提取试剂盒
WE0193	RNA纯化	超纯RNA提取试剂盒(DNase I)
WE0147	核酸扩增(PCR)	一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(荧光探针)
WE0140	核酸扩增(PCR)	实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ)
WE0343	一抗	抗V5标签单克隆抗体
WE0283	蛋白质研究	Tris-甘*酸蛋白电泳液(pH8.3, 10×)
WE0358	二抗	DyLight594标记山羊抗人IgG(H+L)
WE0346	一抗	抗GFP标签单克隆抗体

 

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