北京Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式检测试剂盒多

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式检测试剂盒多少钱，我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式检测试剂盒多少钱
品牌：百奥莱博
编号：WE0328
产地：国产|进口
  本试剂盒是一种采用Annexin-PE与7-AAD双染法进行细胞早期凋亡分析的检测试剂盒。
  细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝*酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性，对PS有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就被破坏。7-AAD是一种核酸染料，可进入死细胞内与DNA结合，能够对坏死和凋亡晚期的细胞进行染色。7-ADD与PI有着相似的荧光特性，但其发射波谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI的最佳替代品，因此通常将Annexin V-PE与ADD配合染色，以区别凋亡早期细胞与坏死细胞和凋亡的晚期细胞。

试剂盒组成：

 

组份	50次
4×Binding Buffer	10ml
7-AAD Viability Staining Solution	500μl
Annexin V-PE	250μl

注意事项：
1、消化细胞时不能用含EDTA的胰酶。
2、本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
3、需自备PBS和去离子水。
4、荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
5、请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤：

1、细胞样品的准备：
a．对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。
b．对于悬浮细胞：1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。

2、用去离子水按1:3稀释Binding Buffer(4ml Binding Buffer+12ml去离子水)。
3、用250μl Binding Buffer重新悬浮细胞，调节其浓度为1×106/ml。
4、取 100μl 的细胞悬液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V-PE 和 10μl 7-AAD 溶液。
5、混匀后于室温避光孵育 15 分钟。
6、在反应管中加400μl PBS，流式细胞仪(FACS)分析。

实验图例：

Jurkat细胞用顺铂诱导凋亡后用Annexin V-PE/7AAD双染流式分析图谱

储存条件：2～8℃，避光保存

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·5×TBE
编号：WE0215
规格：500ml
本品为5×Tris-硼*(代"酸")缓冲液，主要用于DNA的琼脂糖凝胶电泳。

·SDS-PAGE上样缓冲液(还原，5×)
编号：WE0288
英文名称：SDS-PAGE Loading Buffer(Reducing, 5×)
规格：5×2ml
  SDS-PAGE上样缓冲液(还原，5×)是以*酚蓝为染料，5倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液，应用于还原型SDS-PAGE的蛋白样品制备和上样。该缓冲液中含有DTT，可使蛋白质分子的链内二硫键和链间二硫键断裂，通过二硫键连接的各蛋白亚单位彼此分离，经考马斯亮蓝染色以后在电泳凝胶上显现清晰蛋白条带。

注意事项：
1、加样前在室温或37-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀，以确保溶液混合均匀。
2、本试剂含有DTT，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
3、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤：
1、将SDS-PAGE上样缓冲液(还原，5×)与蛋白样品按照1：4的比例混匀。
2、将蛋白样品置于沸水浴中加热3-5分钟。
3、待蛋白样品充分变性后冷却至室温，以小于3000 rpm的条件离心30秒。
4、离心后，以取适量上清，直接加入SDS-PAGE凝胶加样孔内, 进行常规电泳。

储存条件：-20℃


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·高纯质粒大提试剂盒
编号：WE0164
英文名称：PlaPure Maxi Extraction Kit
规格：10次
  本试剂盒提供一种简单、快捷、高效的提取质粒的方法，在碱裂解法裂解细胞的基础上，采用独特的硅基质膜吸附技术和试剂配方，通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的质粒DNA，经过两步洗涤，一步洗脱，最大限度的去除蛋白质、基因组、RNA和其他杂质。得到的DNA可直接用于PCR、酶切、测序、连接等生物学实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer P1	125ml
Buffer P2	125ml
Buffer P3	125ml
Buffer PB	30ml
Buffer PW(浓缩液)	50ml
Buffer EB	30ml
RNase A(10 mg/ml)	2ml
吸附柱DQ及收集管	10套
离心管(50ml)	10个

自备试剂：无水乙醇，异丙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，更长时间保存可置于2～8℃，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可稳定保存6个月。
2、第一次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1 中，混匀，置于2–8℃保存，使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请先检查Buffer P2 、Buffer P3、Buffer PB是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清(请勿剧烈晃动Buffer P2)。
5、注意不要直接接触Buffer P2 和Buffer P3，使用后应立即盖紧盖子。
6、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
7、所有离心步骤均可在室温下进行。

操作步骤：
1、取150ml过夜培养的菌液加入离心管(自备)中，12000×g离心3分钟收集细菌，尽量吸弃全部上清。
注意：质粒拷贝数较低或>10 kb时，可以使用更多菌液通过二次离心将菌体沉淀收集到同一个离心管中，同时后续所加试剂Buffer P1、P2及P3的量需按比例加倍。所加试剂的量必须能够充分裂解菌体，菌体过多、裂解不充分都会降低质粒的提取效率。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入12ml Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮细菌沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，使提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入12ml Buffer P2，温和地上下颠倒混匀6-8次，充分混匀使菌体裂解，室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。并且此步骤所用时间应不超过5分钟，避免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入12ml Buffer P3，立即上下颠倒混匀6-8次，充分混匀，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5分钟。12000×g离心10分钟。
注意：Buffer P3 加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
5、取上清加入新的离心管(自备)中，向上清中加入11ml异丙醇，上下颠倒混匀。
6、将步骤5中的混合溶液转移到已装入收集管的吸附柱DQ中。12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：吸附柱的最大容积为15ml，所以第5步中所得溶液分多次过柱。如果离心机转子倾角较大时，建议加入吸附柱的溶液体积不超过10ml，以防发生漏液现象。
7、向吸附柱中加入2.5ml Buffer PB，12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入10ml Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液。
9、重复步骤8。
10、将吸附柱重新放回收集管中，12000×g离心5分钟，倒掉废液，将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
11、将吸附柱置于一个新的收集管中，向吸附膜的中间部位加入1-3ml Buffer EB，室温放置2-5分钟，12000×g离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意：
1)为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5分钟，12000×g离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。
2)洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5范围内(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
3)质粒拷贝数较低或>10 kb时，Buffer EB在65-70℃水浴预热，适当延长吸附和洗脱的时间，可以增加提取效率。

储存条件：室温(15～30℃)


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ARB12223 大鼠血小板活化因子(PAF)检测服务 Rat platelet activating factor,paf ELISA KIT
三乙*(代"烯")四胺六乙酸 Rhodamine B 869-52-3
10191-18-1 BES  N,N-双(2-)-2-*基乙磺酸
F040401 乙肝表面抗原 HBSAg
6106-21-4 Succinic acid Sidium 琥珀酸*
ARB13233 小鼠淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)Elisa定量检测 Mouse lymphocyte function associated antigen 3,lfa-3 ELISA KIT
ARB12671 大鼠雌二醇受体(ER)血清中含量检测 Rat estradiol receptor,er ELISA KIT
7585-39-9 β-环糊精(β-环状糊精) β-Cydodextrin
EDTA溶液(0.5mol/L,pH8.0)   100ml|500ml
75881-23-1 Alcian Blue8GX  阿利新蓝8GX
ARB13557 兔子内皮型一氧化*(代"氮")合成酶3(eNOS-3)Elisa分析 Rabbit endothelial nitric oxide synthase 3,enos-3 ELISA KIT
TEMED   10ml
ARB13925 猪表皮生长因子(EGF)酶联免疫定量检测 Porcine epithelial growth factor,egf ELISA KIT

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