北京促销Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式检测试剂

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名称：北京促销Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式检测试剂盒价格
编号：WE0328
规格：50次
英文名：Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit
  本试剂盒是一种采用Annexin-PE与7-AAD双染法进行细胞早期凋亡分析的检测试剂盒。
  细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝*酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性，对PS有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就被破坏。7-AAD是一种核酸染料，可进入死细胞内与DNA结合，能够对坏死和凋亡晚期的细胞进行染色。7-ADD与PI有着相似的荧光特性，但其发射波谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI的最佳替代品，因此通常将Annexin V-PE与ADD配合染色，以区别凋亡早期细胞与坏死细胞和凋亡的晚期细胞。

试剂盒组成：

 

组份	50次
4×Binding Buffer	10ml
7-AAD Viability Staining Solution	500μl
Annexin V-PE	250μl

注意事项：
1、消化细胞时不能用含EDTA的胰酶。
2、本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
3、需自备PBS和去离子水。
4、荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
5、请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤：

1、细胞样品的准备：
a．对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。
b．对于悬浮细胞：1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。

2、用去离子水按1:3稀释Binding Buffer(4ml Binding Buffer+12ml去离子水)。
3、用250μl Binding Buffer重新悬浮细胞，调节其浓度为1×106/ml。
4、取 100μl 的细胞悬液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V-PE 和 10μl 7-AAD 溶液。
5、混匀后于室温避光孵育 15 分钟。
6、在反应管中加400μl PBS，流式细胞仪(FACS)分析。

实验图例：

Jurkat细胞用顺铂诱导凋亡后用Annexin V-PE/7AAD双染流式分析图谱

储存条件：2～8℃，避光保存

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·实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ)
编号：WE0140
英文名称：BaReSYBR Mixture
规格：5ml
  本品是专用于染料法(SYBR GreenⅠ)实时荧光定量PCR的预混体系， 浓度为2×， 包含HotStar Bes Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列的检测。本品中所含的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可以用于多种不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。经独特方法处理的热启动DNA聚合酶和专门的PCR缓冲液使本品具有特异性高的特点，满足常规荧光定量检测。该产品应用范围广，适用于无需ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪。

产品组成：

组份	5ml
2×BaReSYBR Mixture	5×1ml
ddH2O	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
3、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
4、本品不能用于探针法荧光定量PCR。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应程序，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系：
 

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaReSYBR Mixture	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。

2、PCR反应程序：
两步法PCR：
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	5 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火/延伸	60℃	1 min
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本产品所采用的热启动酶需在预变性95℃、5 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考；若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
3)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融


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十六烷基二甲基乙基*化铵 Active red 124-03-8
PY04-047  万古霉素  1mg/支×10支  每支添加于100ml改良月桂基硫*(代"酸")盐胰蛋白胨肉汤(mLST)培养基中制成mLST-Vm，用于阪崎肠杆菌分子生物学检验方法选择性增菌培养
BTN80925 大提柱式植物DNAOUT Maxi Column Plant DNAOUT
ARB10737 人纤维连接蛋白(FN)Elisa方法检测 Human fibronectin,fn ELISA KIT
ARB14217 大鼠胃泌素(GAs)Elisa分析 
BL1057 伊红美兰琼脂
10035-04-8 Calcium Chloride　 *化*
柠檬酸铋 Potassium sulfate 813-93-4
ARB12983 小鼠抑瘤素M(OSM)酶联免疫定量检测 Mouse oncostatin-m,osm ELISA KIT
BTN80801 柱式拭子DNAOUT Column Swab DNAOUT
BTN130575 小鼠抗c-Myc标签单抗 Anti c-Myc-Tag Mouse Mab
ARB12594 大鼠基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/GelAtinAse B)代做ELISA实验 Rat matrix metalloproteinase 9/gelatinase b,mmp-9 ELISA KIT
ARB10701 人多巴色素异构酶(DT)ELISA检测服务 Human dopachrome tautomerase,dt ELISA KIT
ARB11470 人胰岛素样生长因子2(IGF-2)Elisa分析 Human insulin-like growth factors 2,igf-2 ELISA KIT
68-26-8 Vitamin A  维生素A(视黄醇)
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·2×Babuddy MasterMix(含染料)
编号：WE0110
英文名称：2×Babuddy MasterMix(With Dye)
规格：1ml|5ml
  本品是由Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase、PCRBuffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase是一种快速、高扩增效率的高保真DNA聚合酶，具有5"-3"DNA聚合酶活性和3"-5"外切核酸酶活性。经过改造的聚合酶其活性区域融合有一段聚合增强结构域，独特的结构极大提升了保真性和延伸速度。Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase的保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，是普通Pfu的6倍。其延伸速率为15-30s/kb，成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷，大大缩短了反应时间。
  本品特别适合于在基因克隆实验中扩增长片段DNA，尤其在扩增>10 kb的DNA片段时，优势更加明显，所扩增的片段最长可达20 kb。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。
  使用本产品扩增得到的PCR产物的3"端不带有“A”碱基，可直接克隆于平末端载体中。如需进行T/A克隆，需在PCR产物末端添加“A”后进行克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高、保真性强的特点。适用于基因克隆、基因定点突变、SNP等实验。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。

产品特点：
1、高保真性：保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，普通Pfu的6倍。
2、扩增速度快：其延伸速率为15-30sec/kb，成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷。
3、特别适合于扩增长片段：扩增的片段长度可长达20kb。

产品组成：

组份	1ml	5ml
2×Babuddy MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

注意：2×Babuddy MasterMix含有Babuddy DNA Polymerase,2×PCR Buffer, 3 mM MgCl2和400μM dNTP mix。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	20μl反应体系	50μl反应体系	终浓度
2×Babuddy MasterMix	10μl	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	2.5μl	0.5μM
Reverse Primer，10μM	1μl	2.5μl	0.5μM
Template DNA	适量	适量	<250ng
ddH2O	up to 20μl	up to 50μl

a．模板：在50μl PCR反应体系中，DNA模板的建议用量为低复杂度模板(如质粒DNA，λDNA等)1 pg- 10ng，高复杂模板(如基因组DNA)50-250ng。
b．引物：引物浓度请以终浓度0.2-1.0μM作为设定范围的参考，推荐终浓度为0.5μM。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件
常规三步法PCR反应：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30 s-3 min
变性	98℃	5-10 s	25-35 个循环
退火	45-72℃	10-30 s
延伸	72℃	2-4 kb/min
终延伸	72℃	5-10 min

a．变性：简单模板的预变性温度为98℃，预变性时间为30 s。对于比较复杂的模板，预变性时间可延长至3分钟。
b．退火：使用本产品时，退火温度设定的基本原则是，当引物长度小于或等于20 nt时，退火温度为引物最低的Tm；当引物长度大于20 nt时，退火温度应在最低Tm的基础上以Tm+3℃退火10-30 s。当无法得到理想的扩增效率时，应以最低的Tm值逐步提升至模板延伸温度。对于Tm高的引物可以使用两步法PCR。
c．延伸：本产品中所包含的Babuddy DNA Polymerase的扩增效率为2-4 kb/min，复杂性低的模板可用4 kb/min，复杂性高的基因组DNA模板，延伸时间则应为2 kb/min，对于一些cDNA模板，延伸时间可增加到1.5 kb/min。
d．循环次数：可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。

当引物的退火温度较高时，建议使用两步法进行PCR扩增：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30 s-3 min
变性	98℃	5-10 s	25-35 个循环
延伸	72℃	2-4 kb/min
终延伸	72℃	5-10 min

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

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