WE0254型BL21(DE3)pLysS感受态细胞北京厂家

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名称：WE0254型BL21(DE3)pLysS感受态细胞北京厂家
编号：WE0254
英文名：BL21(DE3)pLysS Competent Cell
品牌：百奥莱博
规格：100μl×10支
  本产品是大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。该菌株携带pLysS质粒，具有*霉素抗性，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107。

产品组成：

 

组份	0.1ml×10支
BL21(DE3)pLysS Competent Cell	10×100μl
Control DNA pUC19，0.1ng/μl	10μl

实验前准备及重要注意事项
1、感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2、转化所有步骤均在无菌条件下操作。
3、包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA，供对照试验使用。

使用方法：
1、取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2、待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3、42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4、向每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5、根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意：
1)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2)新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

储存条件：-80℃。

除WE0254型BL21(DE3)pLysS感受态细胞北京厂家外，我公司正在打折促销以下产品：
ARB10401 人可溶性肿瘤坏死因子α受体(sTNFαR)酶标法分析 Human soluble tumor necrosis factorαreceptor,stnfαr ELISA KIT
硫*(代"酸")酯酶 Sodium taurocholate hydrate 9016-17-5
癸酸乙酯 4-Bromobenzoic acid 110-38-3
PP2401 UltraECL底物化学发光检测试剂盒
ARB11248 人轴突生长诱向因子4(Ntn4)定量分析 Human netrin-4,ntn4 ELISA KIT
ARB12740 小鼠I型胶原交联羧基末端肽(ICTP)酶联免疫定量检测 Mouse cross-linked carboxy-terminal teloPeptide of type i collagen,ictp ELISA KIT
CTAB抽提液   500ml
F020103 兔抗辣根过氧化物酶抗体 Rabbit Anti-HRP
ARB11446 人破伤风抗体(TetAnus Ab)酶免分析 Human tetanus antibody ELISA KIT
PY01-154  脱氧核糖核酸酶I(1000u/mg)  0.1克  
ARB12033 大鼠β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)elisa检测 Rat amyloid beta Peptide 1-42,aβ1-42 ELISA KIT
J0308                  兔抗大鼠IgG(H+L)抗血清                          
二乙三胺五乙酸 N-Acetylneuraminic Acid Aldolase 67-43-6
BTN131072 预稀释BSA蛋白标准品 Instant BSA Standard
SJ0646 M-MLV
F030439 胶体金标记山羊抗人IgG Fab抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG Fab*GOLD
BL0879 兔抗人纤维蛋白原免疫血清 0.5ml
BTN3100 RNA长效保存液 RNASAVER
DN溶液(10%)   100ml
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·细菌RNA提取试剂盒(含DNase I)
编号：WE0199
英文名称：RNAtiqu Bacteria RNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统，可从细菌或培养的动物细胞中快速提取总RNA。30-40分钟内即可完成反应，提取的总RNA纯度极高，没有蛋白质和其他污染，适用于RT-PCR、Real-Time RT-PCR、芯片分析、体外翻译等实验。

试剂盒组成：

组份	50次
DNase I	1000 U
10×Reaction Buffer	1000μl
Buffer RL	35ml
Buffer RW1	40ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
RNase-Free Water	10ml
过滤柱FL及收集管	50套
吸附柱RM及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	100个

保存条件：DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂：Lysozyme(WE0214S)、β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)配制溶液应使用无RNase的水。
3)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇至终浓度为1%，如1ml Buffer RL加10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL 4℃可保存1个月，如出现沉淀，请加热溶解后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
4、如未特殊说明，所有离心步骤均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

操作步骤：
1、4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心2分钟收集菌体(菌体量最大不超过1×109)，小心去除所有上清。
注意：上清如果有残留，会影响后续的消化过程。
2、用含有Lysozyme的100μl TE缓冲液彻底重悬菌体，室温孵育。具体配方和孵育时间如下：

	TE缓冲液中Lysozyme的终浓度	孵育时间
G-细菌	400μg/ml	3-5分钟
G+细菌	3 mg/ml	5-10分钟

3、加入350μl裂解液RL(使用前请检查是否加入β-巯基乙醇)，涡旋震荡混匀(此步骤可能出现不溶性沉淀)，将溶液与沉淀全部加入到已装入收集管的过滤柱中，12000rpm离心2分钟。
4、向上步得到的滤液中加入250μl无水乙醇，混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中，12000rpm离心1分钟，弃掉废液，将吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、配制DNase I 混合液：取52μl RNase-Free Water，向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl)，混匀， 配制成终体积为80μl的反应液。
7、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。
8、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心1分钟,弃废液。
10、重复步骤9。
11、将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心2分钟。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱装入新的RNase-Free的收集管中，向吸附膜的中间加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤12。

储存条件：室温(15～30℃)。


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·2×BAmp MasterMix(含染料)
编号：WE0106
英文名称：2×BAmp MasterMix(With Dye)
规格：5ml
  BAmp MasterMix由BAmp DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。BAmp DNA Polymerase是一种兼具高扩增效率和高保真性的耐热聚合酶。其主要特点是可以高效扩增长片段DNA，尤其在扩增>10 kb的DNA片段方面，其优势更加明显，所扩增的片段最长可以达到40 kb。该酶具有高度的延伸和校对能力，保真度高于普通Taq酶。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，重复性好。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。适用于构建基因图谱、序列测定及分子遗传学研究等。

产品组成：

组份	1ml	5ml
2×BAmp MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

注意：2×BAmp MasterMix含有BAmp DNA Polymerase,3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BAmp MasterMix(With Dye)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，BAmp DNA Polymerase的扩增效率为2.0 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

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