北京现货WE0256型蛋白磷酸酶抑制剂混合物优惠

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货WE0256型蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂混合物优惠，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货WE0256型蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂混合物优惠
产地：国产|进口
英文名：Phosphatase Inhibitor Cocktail(100×)
编号：WE0256
品牌：百奥莱博
  组织和细胞在裂解过程中会释放大量内源性蛋白*(代"磷")酸酶，以各种方式催化磷酸化蛋白去磷酸化。本产品含四种广谱的磷酸酶抑制剂混合物，可有效抑制丝*酸/苏*酸磷酸酶、蛋白酪*酸磷酸酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等。该混合物为100倍浓缩水溶液，可直接加入任何组织类型和细胞的裂解产物中，均能有效抑制磷酸化蛋白质的去磷酸化，从而维护蛋白质的磷酸化状态。适用于Western Blot和免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质、蛋白激酶活性测定等。

使用方法：
取出实验所需蛋白抽提试剂进行预冷，按照1:99比例加入Phosphatase Inhibitor Cocktail(例如990μl抽提试剂中加入10μl Phosphatase Inhibitor Cocktail)，使其在抽提试剂中成1×工作液。

储存条件：2～8℃

北京现货WE0256型蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂混合物优惠极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(低含量ROX校正染料)
编号：WE0138
英文名称：SuperSYBR One Step RT-qPCR Kit(Low ROX)
规格：100次
  本试剂盒是一步法Real-Time RT-qPCR专用试剂盒。所含的SYBR Green I荧光染料可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可以用于多种不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应，逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。全新高效逆转录酶RNase H活性缺失，减少了逆转录反应中RNA的降解。该酶逆转录效率高，可对少量 RNA模板进行良好的逆转录反应。与RNA亲合性高，能通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。全新高效热启动酶，在常温下酶的活性被封闭，从而有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，极大提高了荧光定量PCR反应的精确性。所包含的缓冲系统使以上两种酶同时发挥最大功效，提高效率。本产品灵敏度高，特异性高，线性范围广，对目的基因定量更准确。

ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。

不需要ROX校正的仪器:(WE0137)
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器：(WE0138)
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器：(WE0139)
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

试剂盒组成：

 

组份	WE0137-100次	WE0138-100次	WE0139-100次
2×SuperSYBR One Step Buffer	1.4ml	1.4ml	1.4ml
SuperSYBR One Step EnzymeMix	50μl	50μl	50μl
50×Low ROX	-	50μl	-
50×High ROX	-	-	50μl
RNase-Free Water	1.5ml	1.5ml	1.5ml

注意事项：
1、本试剂盒中的各试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品以RNA为模板进行一步法RT-PCR实验，在操作过程中应避免RNase污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，实验相关耗材应用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并高压灭菌30分钟后使用。
3、SuperSYBR One Step RT-qPCR Buffer中含有SYBR Green I 荧光染料，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
4、本试剂盒中的各试剂应避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
5、本试剂盒必须使用特异性引物，引物的选择可根据具体实验来选择，引物设计的好坏直接影响到RT-PCR反应的结果，设计引物时需考虑GC含量，引物长度，引物位置，PCR产物的二级结构等因素，建议采用专业的引物设计软件进行设计。
6、本品不能用于探针法荧光定量PCR。

操作步骤：
1、将RNA模板、引物、2×SuperSYBR One Step Buffer、SuperSYBR One Step EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、PCR反应体系
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
2×SuperSYBR One Step Buffer	12.5μl	1×
Forward Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
SuperSYBR One Step EnzymeMix	0.5μl
RNA Template	Xμl	10 pg～100ng
50×Low ROX or High ROX(optional)	0.5μl	1×
RNase-Free Water	up to 25μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以终浓度0.1-0.5μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX。

3、涡旋震荡混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。
4、RT-qPCR反应条件(荧光定量PCR为两步法)，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为例。
 

步骤	温度	时间	循环数
反转录	45℃	10 min
PCR预变性	95℃	5 min
变性	95℃	10 s	30-40个循环
退火/延伸	60℃	45 s
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)建议采用两步法PCR反应程序，若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考；若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增。
2)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI7500荧光定量PCR仪为参照设定。

RT-qPCR反应条件(荧光定量PCR为三步法)：
 

步骤	温度	时间	循环数
反转录	45℃	10min
PCR预变性	95℃	5min
变性	95℃	15s	30-40 个循环
退火	56℃-64℃	30s
延伸	72℃	30s
融解曲线分析	95℃	15s
	60℃	1min
	95℃	15s
	60℃	15s

注意：
1)三步法PCR扩增时，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
2)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融


北京现货WE0256型蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂混合物优惠关键词：蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂混合物,WE0256,Phosphatase Inhibitor Cocktail(100×)


·细菌蛋白抽提试剂盒
编号：WE0261
英文名称：Bacterial Protein Extraction Kit
规格：100次
  本试剂盒使用温和的非离子型去污剂，适用于大肠杆菌表达的重组蛋白及转染昆虫细胞的蛋白提取。提取过程中不需进行超声破碎，有效避免了外源蛋白的污染。细菌蛋白抽提试剂盒在抽提试剂的基础上添加了溶菌酶、DNase I和蛋白酶抑制剂混合物，可提高蛋白提取效率并减轻因DNA引起的粘稠现象，有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物学活性，可进行IP，Western Blot，蛋白纯化等下游操作。

试剂盒组成：

组份	100次
Bacterial Protein Extraction Reagent	100ml
Protease Inhibitor Cocktail	1ml
Lysozyme(50 mg/ml)	200μl
DNaseⅠ(1000U/ml)	100μl

保存条件：Lysozyme、DNaseⅠ、Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：室温

注意事项：
1、本产品适用于从新鲜或冻存细菌和昆虫细胞中提取蛋白。
2、本品采用Tris缓冲系统，蛋白提取后的纯化操作，请使用相同的缓冲系统。
3、使用本产品获得的蛋白裂解液，可用BCA或Bradford法进行蛋白定量。
4、对于特殊的菌株，如果抽提效果不理想，可在抽提蛋白前冰冻样品。
5、根据具体情况，可在本产品中加入蛋白酶抑制剂、盐、螯合剂、还原剂等。

使用方法：

细菌可溶性蛋白提取
1、5000×g离心10分钟，收集菌体。
2、可选步骤：每1ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入1μl DNase I(1000U/ml)、2μl Lysozyme(50 mg/ml)和10μl Protease Inhibitor Cocktail，涡旋震荡混匀。
3、按照每克菌体沉淀加入20ml Bacterial Protein Extraction Reagent的比例，向菌体沉淀中加入抽提液，充分涡旋或用移液器上下吹打直至菌体完全重悬。
4、重悬后，室温孵育10-15分钟(放置时间应根据细胞类型不同进行调整)。
5、15000×g离心5分钟。
6、转移上清至新的离心管中(上清中即为可溶性蛋白)，进行蛋白定量及下游实验。
注意：如目的蛋白以包涵体形式存在，可使用包涵体蛋白溶解液进行溶解或优化表达条件增加可溶性蛋白的表达。

昆虫细胞蛋白提取
1、低速离心收集细胞。每1ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入10μl Protease Inhibitor Cocktail即为1×工作液。
2、称量细胞湿重，按10ml/g的量加入1×工作液。
3、重悬后，冰上孵育20分钟(冰上放置时间应根据细胞类型不同进行调整)。
4、15000×g离心15分钟，分离可溶性蛋白。

常见问题分析
 

问题	可能原因	解决方法
目的蛋白不溶	目的蛋白表达为包涵体	优化表达条件或使用包涵体蛋白溶解液
		在蛋白抽提试剂中加入Lysozyme 和DNase I
加入Lysozyme 后目的 蛋白仍没有提取出来	温度过低	将使用试剂恢复至室温
	Lysozyme 活性降低或失活	加入更多的Lysozyme 或更换新的酶
提取物粘度高	DNase I 活性降低或失活	加入更多的DNase I 或更换新的DNase I
		将*离子的终浓度增加至2 mM
蛋白抽提后仍有大 部分蛋白存在于沉淀中	蛋白量过大	加入Lysozyme及DNase I
蛋白抽提试剂有沉底析出	温度过低	将蛋白抽提试剂恢复至室温

储存条件：-20℃


北京现货WE0256型蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂混合物优惠关键词：蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂混合物,WE0256,Phosphatase Inhibitor Cocktail(100×)

PY01-101  乳酸*  100克  
ARB12404 大鼠组织因子途径抑制物(TFPI)elisa测定使用说明书 Rat tissue factor pathway inhibitor,tfpi ELISA KIT
BTN130646 尿嘧啶-DNA糖基化酶 Uracil DNA Glycosylase(UDG)
MOPS电泳缓冲液(1×,RNase free)   500ml
BL1065 MH(A)培养基
56-84-8 Guanosine鸟苷
F030428 胶体金标记兔抗猫IgG抗体 Rabbit Anti-Cat IgG*GOLD
ARB10020 人3-硝基酪*酸(3-NT)含量分析 Human 3-nitrotyrosine,3-nt ELISA KIT
HC0036 96孔U型底培养板
BTN120619 dGTP溶液,100mM dGTP Solution
*并-18-冠醚-6 BAEE 14098-24-9
BL1247 D2000 DNA Ladder
病毒检测用RNA提取试剂盒（精确） 

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