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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
469
- 英文名:
Mouse&Rat Tail Genomic DNA Extraction Kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
室温(15~30℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货鼠尾基因组DNA提取试剂盒厂家,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京现货鼠尾基因组DNA提取试剂盒厂家
品牌:百奥莱博
规格:50次
编号:WE0186
产地:国产|进口
英文名:Mouse&Rat Tail Genomic DNA Extraction Kit
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的小鼠或大鼠鼠尾中提取高纯度的总DNA。该试剂盒提供的方法简单易行,纯化过程无需*酚或*仿抽提,可获得最大为50 kb的DNA片段,同时对100 bp的片段也能有效回收。本试剂盒采用独特的裂解液,有效裂解鼠尾样本,优化的缓冲体系使裂解鼠尾后产生的DNA高效结合到硅基质吸附柱上,而其他污染物可流过膜;PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除,最后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可得到高纯度的DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 |
| Buffer GTT | 15ml |
| Buffer GL | 15ml |
| Buffer GW1(浓缩液) | 13ml |
| Buffer GW2(浓缩液) | 15ml |
| Buffer GE | 15ml |
| 蛋白酶K | 25 mg |
| 蛋白酶K 储存液 | 1.25ml |
| 吸附柱DM及收集管 | 50套 |
自备试剂:无水乙醇
产品特点
1、专用于从大鼠或小鼠的鼠尾中分离纯化高纯度总DNA。
2、无需有机溶剂提取以及乙醇沉淀,彻底去除污染物及下游反应抑制物,快速提取高品质DNA。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解,-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer GL于56℃水浴重新溶解。
操作步骤:
1、取一段大鼠或两段小鼠长度为0.4-0.6 cm的尾巴,在液氮中研磨成细粉或剪碎放入离心管(自备)中。加入180μl Buffer GTT,振荡混匀。
注意:确保组织的起始量不要超出推荐范围。
2、加入20μl 蛋白酶K ,涡旋振荡,彻底混匀。
3、置于56℃水浴,直至组织溶液完全清澈,一般情况下需要消化6-8小时,孵育过程中涡旋震荡,使样品均匀分散。
注意:1)如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质,必要时过夜消化或再加入20μl 蛋白酶K 消化,不会影响后续操作。
2)如需去除RNA,在上述步骤完成后加入4μl 100 mg/ml 的RNase A溶液(货号:WE0225S),震荡混匀,室温放置5-10分钟。
4、12000rpm(~~13400×g)离心1分钟,以除掉未消化的类似于鼠毛等组织。将上清转移到一个新的离心管(自备)中。
5、加入200μl Buffer GL,涡旋震荡,充分混匀。加入200μl无水乙醇,涡旋震荡,充分混匀。短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。
注意:
1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
2)如果多个样品一起操作,Buffer GL和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入样品。
3)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续实验。
6、将步骤5中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤8。
9、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μlBuffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤10;若洗脱体积小于200μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg,推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
储存条件:室温(15~30℃)。
北京现货鼠尾基因组DNA提取试剂盒厂家极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·TBST(pH8.0,10×)
编号:WE0310
规格:500ml
·Tris-甘*酸蛋白电泳液(pH8.3, 10×)
编号:WE0283
英文名称:Tris-Glycine SDS Buffer(pH8.3, 10×)
规格:500ml
·Protein G琼脂糖凝胶
编号:WE0270
英文名称:Protein G-Sepharose
规格:5ml
本产品为Protein G与Sepharose偶联后产物,可从血清,腹水,细胞培养上清和细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物丌同亚型的抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白。Protein G是链球菌(group C和G)细胞表面蛋白。它不Protein A类似,通过不免疫球蛋白的Fc区相互作用,可结合大多数哺乳动物的IgG。但两者结合特异性有所丌同。Protein G对人IgG3,小鼠IgG1,大鼠IgG2a等具有高亲和力。天然Protein G具有白蛋白和细胞表面结合域。重组Protein G去除了白蛋白和细胞表面结合域,以减少非特异性结合。本产品具有广谱 IgG结合、高Fc段结合活性、高抗体吸附量和性能稳定等特点,可重复多次使用。
注意事项:
1、凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温后装柱,避免产生气泡影响柱效。
2、装柱时尽可能维持凝胶长径比为5:3-2:1,长径比过大将导致洗脱峰拖尾,洗脱体积增大;长径比过小将导致样品与填料接触时间短,吸附不充分,填料吸附蛋白量小。
3、若上样液中抗体浓度过高,应使用平衡缓冲液稀释至1-2 mg/ml,以免上样浓度过高影响柱效。
4、可以采用降低上样时的流速来增加样品与填料接触时间从而提高纯化抗体量。
5、凝胶用低pH缓冲液洗脱时间应尽可能短,洗脱后用中性缓冲液尽快中和至pH中性,以延长亲和介质的使用寿命。
6、洗脱后,应立刻用如中和缓冲液将收集到的抗体溶液中和到中性(pH7.4左右),以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活。
7、填料使用后应用0.1 M柠檬酸*缓冲液(pH3.0)做再生处理,长期采用极端的洗脱条件将缩短亲和介质的使用寿命。
使用方法:
I 缓冲液的准备
1、平衡缓冲液:20 mM PBS,150 mM NaCl,pH7.4-8.5。
2、洗脱缓冲液:0.1 M Glycine,pH2.5-3.0。
3、再生缓冲液:1 M NaCl。
4、中和缓冲液:1 M Tris-Cl,pH9.0。
注意:
1)以上缓冲液使用前均需0.45μM滤膜过滤。
2)为提高抗体和介质的吸附力。可适当提高平衡缓冲液中的盐浓度和ph值。
II 样本制备
1、样品用平衡缓冲液稀释5-10倍。
2、细胞培养液中大量的血清蛋白会对亲和层析造成一定的干扰,去血清处理或稀释样品将提高纯化抗体收率。
注意:样品在上柱前需0.45μM微孔滤膜过滤。
III 操作步骤
1、将Protein G-Sepharose填料混匀后加入层析柱,室温静置10分钟,待凝胶与溶液分层后,把底部的出液口打开,让乙醇通过重力作用缓慢流出。
2、向装填后的柱中加入3-5个柱床体积的超纯水将乙醇冲洗干净,用平衡缓冲液流洗5-10个柱床体积平衡柱子。
3、将样品上柱,上样流速60 cm/h。
4、平衡缓冲液再洗5-10个柱床体积,直至基线平稳。
5、洗脱缓冲液洗脱,收集洗脱峰,用中和缓冲液将洗脱收集样品中和到中性。
6、立即用5-10个柱床体积平衡缓冲液平衡柱子到中性。
7、再生缓冲液流洗3-5个柱床体积。先后用纯水、20%乙醇分别流洗3-5个柱床体积。柱子置于2~8℃保存。
注意:操作中如果没有实时的蛋白监测系统,收集洗脱峰时可以分阶段收集到多个管中,最后根据测定结果重新调整收集方式。
8、本产品使用10次以上后先用20%乙醇洗5个柱床体积,再用70%乙醇洗脱5-10个柱床体积,再用20%乙醇流洗3-5个柱床体积。柱子置于2~8℃保存。
储存条件:2~8℃,避免冷冻
北京现货鼠尾基因组DNA提取试剂盒厂家关键词:Mouse&Rat Tail Genomic DNA Extraction Kit,WE0186,鼠尾基因组DNA提取试剂盒
·Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒
编号:WE0325
英文名称:Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit
规格:50次
本试剂盒是一种采用Annexin V-FITC与PI双染法进行细胞早期凋亡分析的检测试剂盒。
细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝*酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性,对PS有高度的亲和性。因此,该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的,也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的,而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就被破坏。另外一种活细胞非透过性荧光染料碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)不能通过完整的活细胞,但能够对坏死和凋亡晚期的细胞进行染色, 因此通常将Annexin V与PI配合染色, 以区别凋亡早期细胞与坏死细胞和凋亡的晚期细胞。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 |
| 4×Binding Buffer | 10ml |
| Propidium Iodide,PI | 500μl |
| Annexin V-FITC | 250μl |
注意事项:
1、本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
2、需自备PBS和去离子水。
3、荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
4、PI对人体有刺激性,请注意适当防护。
5、请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作步骤:
1、细胞样品的准备:
a.对于贴壁细胞:小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞,至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时,加入前面收集的细胞培养液,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清,可以残留约50μl左右的培养液,以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞,小心吸除上清。再次加入1ml 4℃预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞。
b.对于悬浮细胞:1000×g左右离心3-5分钟,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清,可以残留约50微升左右的培养液,以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS,重悬细胞,并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞,小心吸除上清,可以残留约50μl左右的PBS,以避免吸走细胞。再次加入1ml 4℃预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞。
2、用去离子水按 1:3 稀释Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去离子水)。
3、用 250μl Binding Buffer重新悬浮细胞,调节其浓度为 1×106/ml。
4、取 100μl 的细胞悬液于 5ml 流式管中,加入 5μl Annexin V/FITC 和 10μl 20μg/ml的PI溶液。
5、混匀后于室温避光孵育 15 分钟。
6、在反应管中加 400μl PBS,流式细胞仪(FACS)分析。
实验图例
储存条件:2~8℃,避光保存
北京现货鼠尾基因组DNA提取试剂盒厂家关键词:Mouse&Rat Tail Genomic DNA Extraction Kit,WE0186,鼠尾基因组DNA提取试剂盒
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