Babuddy超保真DNA聚合酶现货价格

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名称：Babuddy超保真DNA聚合酶现货价格
产地：国产|进口
编号：WE0109
英文名：Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase
规格：100U
  Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase是一种快速、高扩增效率的高保真DNA聚合酶，具有5"-3"DNA聚合酶活性和3"-5"外切核酸酶活性。经过改造的Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase，其活性区域融合有一段聚合增强结构域，独特的结构极大提升了保真性和延伸速度。Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase的保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，是普通Pfu的6倍。其延伸速率为15-30 sec/kb，成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷，大大缩短了反应时间。本品特别适合于在基因克隆实验中扩增长片段DNA，尤其在扩增>10 kb的DNA片段时，优势更加明显，所扩增的片段最长可达20kb。

  本产品中包含两种PCR缓冲液，经过优化的缓冲体系使酶的应用更加广泛，即使以复杂的基因组DNA为模板，也可以保证很高的特异性和长片段的扩增。特有的PCR增强剂DMSO使GC含量高，有二级结构和重复序列的复杂模板也能得到高效扩增。

  使用本产品扩增得到的PCR产物的3"端不带有“A”碱基，可直接克隆于平末端载体中。如需进行T/A克隆，需在PCR产物末端添加“A”后进行克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高、保真性强的特点。适用于基因克隆、基因定点突变、SNP等实验。

产品特点
1、高保真性：保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，普通Pfu的6倍。
2、扩增速度快：其延伸速率为15-30sec/kb，成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷。
3、特别适合于扩增长片段：扩增的片段长度可长达20kb。

产品组成：

 

组份	20μl×250次(100 U)
Babuddy DNA Polymerase，2U/μl	50μl
5×Babuddy HF Buffer	1.5ml
5×Babuddy GC Buffer	1.5ml
100% DMSO	0.5ml
50 mM MgCl2	1.5ml

注意：本产品的5×Babuddy HF 和GC Buffer中含有7.5 mM*离子。

活性定义：
在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、核酸内切酶活性检测：50μl反应体系中，10 U本酶与0.2 mM dNTPs和1μg的pUC19质粒于37℃温育4小时，<10%的pUC19质粒由超螺旋变为缺刻状态。
2、7.5 kb基因组DNA PCR扩增：50μl反应体系，1×Babuddy HF Buffer，50ng基因组DNA，1 U Babuddy DNA聚合酶，200μM dNTPs和1μM引物，30个循环PCR扩增出7.5 kb目的片段。
3、20 kb λDNA PCR扩增：50μl反应体系，5×Babuddy HF Buffer，10ng λDNA，1 UBabuddy DNA聚合酶，200μM dNTPs和1μM引物，22个循环PCR扩增出20 kb目的片段。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	20μl反应体系	50μl反应体系	终浓度
5×Babuddy HF Buffer	4μl	10μl	1×
dNTP Mix，2.5 mM each	1.6μl	4μl	200μM each
Forward Primer，10μM	1μl	2.5μl	0.5μM
Reverse Primer，10μM	1μl	2.5μl	0.5μM
Template DNA	适量	适量	<250ng
100% DMSO	0.6μl	1.5μl	3%
Babuddy DNA Polymerase	0.2 μl	0.5μl	1 U/50μl
ddH2O	up to 20μl	up to 50μl

注意：
1)对于复杂模板或高GC含量的模板，请使用5×Babuddy GC Buffer。
2)可选步骤：对于复杂模板，如高GC含量、带有复杂二级结构的序列，可加入本产品中提供的100%DMSO或其他PCR添加物，以提高扩增效率，推荐终浓度为3%，也可按照2%的浓度递增优化。由于DMSO可以降低引物的Tm值，因此若DMSO使用浓度很高，需降低退火温度。

a.模板：在50μl PCR反应体系中，DNA模板的建议用量为低复杂度模板(如质粒DNA，λDNA等)1 pg- 10ng，高复杂模板(如基因组DNA)50-250ng。
b.引物：引物浓度请以终浓度0.2-1.0μM作为设定范围的参考，推荐终浓度为0.5μM。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
c.*离子：*离子浓度请以终浓度1.5-3 mM作为设定范围的参考。本产品的 5×Babuddy HF Buffer和GC Buffer中已经含有7.5 mM*离子，可根据dNTP浓度、引物和模板来调整，由此优化反应体系。若引物或模板中有螯合剂(如EDTA)存在，则应提高*离子浓度。若需要对*离子浓度进行优化时，可使用本产品中提供的MgCl2按照0.5 mM浓度梯度逐步调整。
d.dNTPs：反应体系中dNTPs的浓度一般为每种200μM，使用本品时，不推荐使用dUTP和带有尿嘧啶的引物或模板。
e.Babuddy酶的浓度：Babuddy酶推荐的使用浓度为1 U/50μl 反应体系，可在0.5-2 U/50μl 反应体系之间优化酶的浓度。

2、PCR反应条件
常规三步法PCR反应：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30 s-3 min
变性	98℃	5-10 s	25-35 个循环
退火	45-72℃	10-30 s
延伸	72℃	2-4 kb/min
终延伸	72℃	5-10 min

a．变性：简单模板的预变性温度为98℃，预变性时间为30 s。对于比较复杂的模板，预变性时间可延长至3分钟。
b．退火：使用本产品时，退火温度设定的基本原则是，当引物长度小于或等于20 nt时，退火温度为引物最低的Tm；当引物长度大于20 nt时，退火温度应在最低Tm的基础上以Tm+3℃退火10-30 s。当无法得到理想的扩增效率时，应以最低的Tm值逐步提升至模板延伸温度。对于Tm高的引物可以使用两步法PCR。
c．延伸：延伸时间应根据所扩增片段的长度和模板复杂程度设定，本产品中所包含的Babuddy DNA Polymerase扩增效率为2-4 kb/min，复杂性低的模板可用4 kb/min，复杂性高的基因组DNA模板，延伸时间则应为2 kb/min，对于一些cDNA模板，延伸时间可增加到1.5 kb/min。
d．循环次数：可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。

当引物的退火温度较高时，建议使用两步法进行PCR扩增：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30 s-3 min
变性	98℃	5-10 s	25-35 个循环
延伸	72℃	2-4 kb/min
终延伸	72℃	5-10 min

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

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·BAmp DNA Polymerase
编号：WE0105
英文名称：BAmp DNA Polymerase
规格：500U
  BAmp DNA Polymerase在具有5"-3"DNA聚合酶活性的同时具有3"-5"外切酶活性，是一种兼具高扩增效率和高保真性的耐热聚合酶。其主要特点是可以高效扩增长片段DNA，尤其在扩增>10 kb的DNA片段方面，其优势更加明显，所扩增的片段最长可以达到40 kb。该酶具有高度的延伸和校对能力，保真度高于普通Taq酶。优化的缓冲体系使酶的应用更加广泛，即使以复杂的基因组DNA为模板，也可以保证很高的特异性和长片段的扩增。特有的PCR增强剂(C-Solution)使GC含量高，有二级结构和重复序列的复杂模板也能得到高效扩增。使用本制品扩增得到的PCR产物的3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。适用于高保真度的长片段PCR扩增和复杂模板的PCR扩增，如构建基因图谱、序列测定及分子遗传学研究等。

产品组成：

组份	500U
BAmp DNA Polymerase, 5 U/μl	100μl
10×PCR Buffer	1.8ml
5×C-Solution(PCR Enhancer)	1.8ml

注意：本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM*离子。

活性定义：
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；
5、室温存放一个月，无明显活性改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
10×PCR Buffer	5μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
BAmp DNA Polymerase, 5 U/μl	0.5μl	2.5 U/50μl
5×C-Solution	10μl	1×
ddH2O up to	50μl

注意：
1)引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)当利用常规条件仍然未能得到扩增时，可以加入5×C-Solution(PCR Enhancer)，PCR增强剂可以使富含GC，有二级结构和重复序列的复杂模板到高效扩增，可以提高反应的特异性。但PCR增强剂也有可能使常规条件成功扩增的反应扩增失败，因此第一次使用PCR增强剂时建议设置一个不加PCR增强剂的对照。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，BAmp DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


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