Babuddy超保真DNA聚合酶现货

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括Babuddy超保真DNA聚合酶现货在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：Babuddy超保真DNA聚合酶现货
规格：100U
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase
  Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase是一种快速、高扩增效率的高保真DNA聚合酶，具有5"-3"DNA聚合酶活性和3"-5"外切核酸酶活性。经过改造的Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase，其活性区域融合有一段聚合增强结构域，独特的结构极大提升了保真性和延伸速度。Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase的保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，是普通Pfu的6倍。其延伸速率为15-30 sec/kb，成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷，大大缩短了反应时间。本品特别适合于在基因克隆实验中扩增长片段DNA，尤其在扩增>10 kb的DNA片段时，优势更加明显，所扩增的片段最长可达20kb。

  本产品中包含两种PCR缓冲液，经过优化的缓冲体系使酶的应用更加广泛，即使以复杂的基因组DNA为模板，也可以保证很高的特异性和长片段的扩增。特有的PCR增强剂DMSO使GC含量高，有二级结构和重复序列的复杂模板也能得到高效扩增。

  使用本产品扩增得到的PCR产物的3"端不带有“A”碱基，可直接克隆于平末端载体中。如需进行T/A克隆，需在PCR产物末端添加“A”后进行克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高、保真性强的特点。适用于基因克隆、基因定点突变、SNP等实验。

产品特点
1、高保真性：保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，普通Pfu的6倍。
2、扩增速度快：其延伸速率为15-30sec/kb，成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷。
3、特别适合于扩增长片段：扩增的片段长度可长达20kb。

产品组成：

 

组份	20μl×250次(100 U)
Babuddy DNA Polymerase，2U/μl	50μl
5×Babuddy HF Buffer	1.5ml
5×Babuddy GC Buffer	1.5ml
100% DMSO	0.5ml
50 mM MgCl2	1.5ml

注意：本产品的5×Babuddy HF 和GC Buffer中含有7.5 mM*离子。

活性定义：
在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、核酸内切酶活性检测：50μl反应体系中，10 U本酶与0.2 mM dNTPs和1μg的pUC19质粒于37℃温育4小时，<10%的pUC19质粒由超螺旋变为缺刻状态。
2、7.5 kb基因组DNA PCR扩增：50μl反应体系，1×Babuddy HF Buffer，50ng基因组DNA，1 U Babuddy DNA聚合酶，200μM dNTPs和1μM引物，30个循环PCR扩增出7.5 kb目的片段。
3、20 kb λDNA PCR扩增：50μl反应体系，5×Babuddy HF Buffer，10ng λDNA，1 UBabuddy DNA聚合酶，200μM dNTPs和1μM引物，22个循环PCR扩增出20 kb目的片段。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	20μl反应体系	50μl反应体系	终浓度
5×Babuddy HF Buffer	4μl	10μl	1×
dNTP Mix，2.5 mM each	1.6μl	4μl	200μM each
Forward Primer，10μM	1μl	2.5μl	0.5μM
Reverse Primer，10μM	1μl	2.5μl	0.5μM
Template DNA	适量	适量	<250ng
100% DMSO	0.6μl	1.5μl	3%
Babuddy DNA Polymerase	0.2 μl	0.5μl	1 U/50μl
ddH2O	up to 20μl	up to 50μl

注意：
1)对于复杂模板或高GC含量的模板，请使用5×Babuddy GC Buffer。
2)可选步骤：对于复杂模板，如高GC含量、带有复杂二级结构的序列，可加入本产品中提供的100%DMSO或其他PCR添加物，以提高扩增效率，推荐终浓度为3%，也可按照2%的浓度递增优化。由于DMSO可以降低引物的Tm值，因此若DMSO使用浓度很高，需降低退火温度。

a.模板：在50μl PCR反应体系中，DNA模板的建议用量为低复杂度模板(如质粒DNA，λDNA等)1 pg- 10ng，高复杂模板(如基因组DNA)50-250ng。
b.引物：引物浓度请以终浓度0.2-1.0μM作为设定范围的参考，推荐终浓度为0.5μM。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
c.*离子：*离子浓度请以终浓度1.5-3 mM作为设定范围的参考。本产品的 5×Babuddy HF Buffer和GC Buffer中已经含有7.5 mM*离子，可根据dNTP浓度、引物和模板来调整，由此优化反应体系。若引物或模板中有螯合剂(如EDTA)存在，则应提高*离子浓度。若需要对*离子浓度进行优化时，可使用本产品中提供的MgCl2按照0.5 mM浓度梯度逐步调整。
d.dNTPs：反应体系中dNTPs的浓度一般为每种200μM，使用本品时，不推荐使用dUTP和带有尿嘧啶的引物或模板。
e.Babuddy酶的浓度：Babuddy酶推荐的使用浓度为1 U/50μl 反应体系，可在0.5-2 U/50μl 反应体系之间优化酶的浓度。

2、PCR反应条件
常规三步法PCR反应：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30 s-3 min
变性	98℃	5-10 s	25-35 个循环
退火	45-72℃	10-30 s
延伸	72℃	2-4 kb/min
终延伸	72℃	5-10 min

a．变性：简单模板的预变性温度为98℃，预变性时间为30 s。对于比较复杂的模板，预变性时间可延长至3分钟。
b．退火：使用本产品时，退火温度设定的基本原则是，当引物长度小于或等于20 nt时，退火温度为引物最低的Tm；当引物长度大于20 nt时，退火温度应在最低Tm的基础上以Tm+3℃退火10-30 s。当无法得到理想的扩增效率时，应以最低的Tm值逐步提升至模板延伸温度。对于Tm高的引物可以使用两步法PCR。
c．延伸：延伸时间应根据所扩增片段的长度和模板复杂程度设定，本产品中所包含的Babuddy DNA Polymerase扩增效率为2-4 kb/min，复杂性低的模板可用4 kb/min，复杂性高的基因组DNA模板，延伸时间则应为2 kb/min，对于一些cDNA模板，延伸时间可增加到1.5 kb/min。
d．循环次数：可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。

当引物的退火温度较高时，建议使用两步法进行PCR扩增：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30 s-3 min
变性	98℃	5-10 s	25-35 个循环
延伸	72℃	2-4 kb/min
终延伸	72℃	5-10 min

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

我公司的Babuddy超保真DNA聚合酶现货，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
ARB12280 大鼠抑制素A(INH-A)酶免分析 Rat inhibin,inh-a ELISA KIT
ARB11091 人垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)酶标法分析 Human pituitary adenylate cyclase activating polyPeptide,pacap ELISA KIT
CYB162023 兔抗鸡IgG(抗血清) 0.5ml
BTN70701 柱式病毒DNAOUT Column Viral DNAOUT
BTN130824 冷启动核酸酶 Cold-active Nuclease
BFD028 呋*(代"喃")它酮快速检测试剂盒
DP210 大量琼脂糖凝胶回收试剂盒
NH水溶液  1mol/L|10% 100ml|500ml
ARB13417 鸡L*丙*酸解*酶(PAL)Elisa定量检测 Chicken l-phenylalanine ammonla-lyase,pal ELISA KIT
聚乙*(代"烯")吡*(代"咯")烷酮 Sodium 1-octanesulfonate 9003-39-8
50-69-1 D-核糖 D-Ribose
ARB11437 人莱姆IgG(Lyme-IgG)免费代测 Human lyme igG ELISA KIT
L-缬*酸 o-Vanillin 72-18-4
微量样品基因组DNA提取试剂盒(毛发/血渍/漱口水) 
Babuddy超保真DNA聚合酶现货关键词：WE0109,Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase,Babuddy超保真DNA聚合酶


·罗丹明山羊抗大鼠IgG(H+L)
编号：WE0374
英文名称：Goat Anti-Rat IgG, TRITC Conjugated
规格：100μl
本产品为TRITC标记的经抗原亲和纯化的山羊抗体，特异识别大鼠IgG重链和轻链，检测灵敏度高，本底低，稳定性好。荧光素标记抗体广泛应用于免疫学的研究。TRITC(四甲基异硫*酸罗丹明)为罗丹明的衍生物，与FITC的黄绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。因其荧光淬灭慢，也可用于单独标记染色。

免疫原：大鼠IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：TRITC，Amax=550; Emax=570
应用范围：对于大多数实验(1：25-100)

·封闭用正常山羊血清工作液(免疫组化封闭液)
编号：WE0320
英文名称：Normal Goat Serum For Blocking
规格：10ml
  正常血清是目前广泛使用的免疫学试验中的封闭及保护试剂。使用正常血清封闭可预先饱和组织切片对蛋白物质的物理吸附位点，从而大大减少组织对检测抗体的非特异性吸附。本封闭液采用优质正常山羊血清为原料，加入稳定剂和蛋白保护剂，可有效的的封闭组织上能与抗体非特异结合的位点，从而减少IHC实验的非特异染色，显著的降低背景。

注意事项：
1、如所用的一抗为山羊来源的(Goat anti-)，请避免使用该封闭液，否则可能造成更多非特异着色。
2、以每张切片加入1滴(约50μl)计算，10ml可做200张切片。
3、为了获得实验最佳效果，请根据实验调整最佳使用量。
4、本产品仅用于诊断和科研，不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤：

1、常规处理欲检测的石蜡或冰冻组织切片或细胞爬片等样本。
2、滴加适量内源性过氧化物酶封闭液，室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
3、滴加适量封闭用正常山羊血清工作液(免疫组化封闭液)，室温孵育10分钟，甩干。
4、进行后续的一抗孵育等IHC染色步骤。

储存条件：2～8℃


Babuddy超保真DNA聚合酶现货关键词：WE0109,Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase,Babuddy超保真DNA聚合酶


·miRNA提取试剂盒
编号：WE0195
英文名称：miRNA Purification Kit
规格：50次
  本试剂盒专用于从各种动物组织、植物组织、细胞、血清、血浆等样本中分离纯化miRNA， 还可以提取siRNA，snRNA等其他小于200nt的小分子RNA，同时也可用于总RNA的提取。本品将酚/胍裂解技术和硅基质膜纯化技术相结合，独特的裂解液在有效抑制RNases的同时，可以通过有机抽提的方法除去细胞或组织样品中的大部分DNA和蛋白。对于一些敏感的下游实验中，如需富集miRNA可适用该试剂盒单独对miRNA进行富集。本品适用样本范围广，制备的RNA纯度高，可直接用于敏感的下游应用，如Northern Blot分析，Real-Time PCR，Microarray Analysis等。

试剂盒组成：

组份	50次
TRIzon Reagent	60ml
Buffer RWT(浓缩液)	15ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
RNase-Free Water	10ml
吸附柱RM及收集管	50套
吸附柱RS及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	50个

保存条件：TRIzon Reagent 2～8℃避光保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂：*仿、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融，否则影响miRNA提取的量和质量。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RWT和Buffer RW2中加入无水乙醇。
4、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

操作步骤：

方法一：miRNA富集(可直接用于敏感的下游实验)
1、样品处理
①组织：将组织在液氮中磨碎。每30-50 mg组织加1ml TRIzon Reagent，震荡混匀。样品体积不超过TRIzon Reagent体积的十分之一。
②单层培养细胞：吸去培养液，加入TRIzon Reagent，每10cm2加入1ml TRIzon Reagent(裂解液用量视培养瓶面积而定)。
③细胞悬液：离心得到细胞沉淀，弃上清。每5×106-1×107细胞加入1ml TRIzon Reagent(细胞不需洗涤)。
④血浆或血清：取200μl血浆或血清样本，加入5倍体积TRIzon Reagent，震荡混匀30秒。
2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次，使其充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
3、可选步骤：4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心5分钟，取上清，转入一个新的离心管(自备)中(如样品中含较多蛋白、脂肪、多糖等，可选做此步骤)。
4、向上清中加入*仿，每使用1ml TRIzon Reagent加入200μl*仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置5分钟。
5、4℃ 12000rpm离心15分钟，样品分为三层：红色有机相，中间层，无色水相，将上层无色水相移到一个新的离心管(自备)中。
6、向步骤5得到的溶液中加入1/3倍体积的无水乙醇， 混匀，将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RM中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱，请分多次转入。12000rpm离心30秒，离心后弃掉吸附柱RM，保留流出液。
7、向步骤6得到的溶液中加入2/3倍体积的无水乙醇，混匀。
8、将上步所得溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RS。若一次不能将全部溶液加入吸附柱，请分多次转入。12000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
9、向吸附柱RS中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心30秒, 倒掉收集管中的废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
10、向吸附柱RS中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
11、重复步骤10。
12、12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱RS置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：此步骤的目的是将吸附柱RS中残留的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
13、将吸附柱RS置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱中间部位加入30-50μlRNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤13。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱RS中，重复步骤13。

方法二：总RNA的提取(提取的总RNA包括miRNA等其他<200 nt的小分子RNA)
1~5步骤同方法一。
6、向步骤5得到的溶液中加入1.25倍体积的无水乙醇，混匀。
7、将上步所得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱RM中，请分多次转入。12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
8、向吸附柱RM中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
9、向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
10、重复步骤9。
11、12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱RM置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：此步骤的目的是将吸附柱RM中残留的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱RM转入新的无RNase离心管中，向吸附柱中间部位加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，室温 12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱RM中，重复步骤12。

储存条件：室温(15～30℃)。

北京百莱博科技有限公司是核酸扩增(PCR)产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购Babuddy超保真DNA聚合酶现货。