- ¥416
- 联迈生物
- LM016
- 中国/上海
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海联迈生物工程有限公司
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
100次
| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| LM016 | 海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 | 100次 | 416.00元 |
海肾萤光素酶是一种分子量约为36kD的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化Coelenterazine氧化成Coelenteramide。在Coelenterazine氧化的过程中，会发出生物萤光(bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定。本试剂盒的检测原理参考图1。
图1. 海肾萤光素酶的检测原理图。
通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或
5’启动子区克隆在luciferase的上游，或把3’-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。海肾萤光素酶一方面常用作萤火虫萤光素酶报告基因检测的内参，以消除由于质粒的转染效率不同而带来的误差；另一方面海肾萤光素酶也可以和萤火虫萤光素酶一样被用于常规的报告基因检测。
海肾萤光素酶催化Coelenterazine发光的最强发光波长为465nm (centered around 465nm)。
本试剂盒可以测定100个样品。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| LM016-1 | 海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液 | 60ml |
| LM016-2 | 海肾萤光素酶检测缓冲液 | 10ml |
| LM016-3 | 海肾萤光素酶检测底物(100X) | 100μl |
| — | 说明书 | 1份 |
海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液和海肾萤光素酶检测缓冲液，4℃保存3个月有效，-20℃保存一年有效；海肾萤光素酶检测底物(100×)，-20℃避光保存6个月有效，-80℃避光保存一年有效。
注意事项：
为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内，例如30秒内；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入海肾萤光素酶检测工作液。
由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品宜使用相同的测定时间。
海肾萤光素酶检测底物(100×)配制在无水乙醇中。由于无水乙醇容易挥发，有时会在初次使用时发现体积明显小于100μl的情况，此时用无水乙醇把体积补足至100μl，并混匀后即可使用。
海肾萤光素酶检测工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用，-20℃可以保存一周。随着保存时间的延长检测效果会不断下降，因此不可配制成工作液后长期保存。
为避免由于质粒转染细胞时效率的差异而带来的误差，可以同时转入适当的萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)的报告基因质粒作为内参，采用联迈生物的双萤光素酶报告基因检测试剂盒(LM016/LM017)进行检测；也可以同时转入β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, β-gal)报告基因质粒作为内参，然后采用联迈生物生产的β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(LM0036)进行检测。采用本试剂盒中的报告基因细胞裂解液裂解获得的样品可以直接用于β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(LM0036)的检测。
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文献和实验janetlee1976 在构建萤光素酶报告基因载体的过程中，我把一个基因的一部分启动子插入到载体中（包含该基因转录起始点），请问是否需要为了避免载体中编码萤光素酶的基因的移码突变，而在转录起始点以下所包含的碱基数必须为3的整倍数呢？比如所包含启动子区域为-1000！~+27（此处是否必须为3的整倍数） woxingwosu 我觉得只要从翻译开始，即ATG， 保持碱基数必须为3的整倍数就可以了。前面的启动子部分没有必要。最好
生物发光是一种依赖于酶和底物的相互作用来产生光的化学过程。所需的酶被称为荧光素酶，底物因荧光素酶的类型而不同（如荧光素）。 常用荧光素酶信息表： 其中最有代表性的是来自萤火虫体内（Firefly）和海肾（Renilla）体内的两类萤光素酶，分别命名为萤火虫荧光素酶（FLuc）和海肾荧光素酶（RLuc），同时近年来研究得较多的是来源于高斯氏菌的高斯荧光素酶（GLuc）。 萤火虫荧光素酶（FLuc）作为最通用和最常见的报告基因，该蛋白质不需要翻译后修饰即可获得酶活性，可用于原核和真核细胞。FLuc
、RNA剪接研究。 萤光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶。单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响，而双报告基因则通过共转染的“对照”作为内参为试验提供一基准线，从而可以在最大程度上减小细胞活性和转染效率等外在因素对实验的影响，使得数据结果更为可信。Dual-Luciferase®双萤光素酶报告基因检测系统在细胞中同时表达萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶，两者没有种源同源性并对应不同的反应底物，故而没有交叉干扰。得益于超强的光
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