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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
258
- 英文名:
Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
2~8℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
ANNEXIN V- FITC/PI凋亡检测试剂盒现货促销的品牌:百奥莱博,是优质的细胞凋亡与增殖产品,用于生化科学研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多ANNEXIN V- FITC/PI凋亡检测试剂盒等细胞凋亡与增殖产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:ANNEXIN V- FITC/PI凋亡检测试剂盒现货促销
英文名:Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit
产地:国产|进口
规格:20T|50T||100T
品牌:百奥莱博
细胞凋亡是细胞的基本特征之一,在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V 是一种分子量为35.8 KD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝*酸(Phosphatidylserine, PS)高亲和力特异结合。FITC-Annexin V 结合到凋亡细胞后,在蓝色光的激发下,发出绿色荧光,区分出凋亡细胞与正常细胞。碘化丙啶(Propidium iodide,PI)是一种核酸染料,它不能穿透完整细胞膜,但对凋亡晚期细胞和死细胞的破损细胞膜能够穿透,并使细胞核红染。将FITC-Annexin V 与PI 匹配使用,可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞区分开来。
储存条件:2~8℃,有效期一年
我公司的ANNEXIN V- FITC/PI凋亡检测试剂盒现货促销,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
·ECL化学发光法检测试剂盒(人IgG)
编号:QN1155
规格:1盒
本试剂盒主要用于western blotting的化学发光显色,含有HRP标记抗人IgG二抗。
SDS-PAGE电泳后,蛋白质按照分子量大小分离,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)后,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶标记的第二抗体起反应,加入发光底物后,能让胶片感光。经显影和定影后,可以在胶片上显示出条带(抗原所在位置)。
试剂盒组分:
封闭试剂———————————30g(可配制400ml)
10倍浓缩抗体稀释液——————50ml
HRP标记兔IgG二抗———————0.3ml,效价1:500~1000
ECL显色液-——————————25mlA+25mlB
常规电泳转膜后:
1)清洗转印膜:将膜剥离下后,作好标记,一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS,防止影响后面的抗体结合。
2)按5g封闭试剂加100ml双蒸水计,配制膜封闭液,配好的膜封闭液为乳白色悬液,将漂洗过的转印膜放入封闭液内,置摇床孵育,室温封闭30min。用TBS-T缓冲液(PH7.6)洗膜,室温漂洗3次每次5min。
3)将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×(10ml,10×抗体稀释液加入90ml双蒸水,混匀,可4℃保存三个月)。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4)用1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中,加入一抗工作液,封口,4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
注:如果所加一抗不同,可在此步将膜沿电泳方向剪成条,分别作好标记,分开孵育。
5)用TBS-T缓冲液(PH7.6)洗膜,室温漂洗3次每次5min。
6)用1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量,按10ml抗体稀释液加入15ul的HRP标记二抗的比例,配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中,加入二抗工作液,封口,37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7)用TBS-T缓冲液(PH7.6)洗膜,室温漂洗3次每次10min。
8)根据用量,取ECL发光液A、B等量混匀,加在膜正面,暗室显色1~5分种。倾去显色液,小心用纸吸去显色液,在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片,做好标记,轻轻的放在膜上,显色30秒到1分钟,取出胶片浸入显影液中,观察显色情况,再放入定影液中1分钟。根据条带强弱,再次感光时可减短或者加长感光时间(从5秒到30分钟)以期达到理想结果。
注意事项:
1.请根据一抗来源选择试剂盒。
2.可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深,可延长膜封闭时间,加长最终漂洗次数与时间。如果
条带过弱,可增加抗体浓度,可延长抗体孵育时间或加长感光时间。
3.TBS-T(0.01M,PH7.6)配制方法:称取NaCl 8.5g,Tris 1.21g,用800ml的双蒸水溶解,用盐*(代"酸")调PH到7.6,再加入0.5ml Tween-20,用双蒸水加至1000ml,混匀即可。(也可按照自己的配制习惯来配制)
储存条件:-20℃避光,有效期一年。
ANNEXIN V- FITC/PI凋亡检测试剂盒现货促销关键词:ANNEXIN V- FITC/PI凋亡检测试剂盒,QN1317,Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit
·中性蛋白酶 5万U/g
编号:QN0399
规格:500g
中性蛋白酶是经选育的枯草芽孢杆菌1398深层发酵培养,后经先进的提取工艺精制而成的一种内切蛋白酶,在一定温度、pH值下,能将大分子蛋白质分解为多肽及*基酸等产物,形成独特的水解风味,可用于食品、饲料、化妆品、营养保健品等蛋白质水解处理。
CAS号:9068-59-1
储存条件:常温干燥
酶活:5万U/g
性状:淡黄色固体粉末
产品特点:
1、中性蛋白酶作为一种内切蛋白酶,具有纯天然、安全无毒、水解能力强、作用范围广等。
2、中性蛋白酶应用于焙烤,可降低面团湿筋度、改良面团可塑性及理化性质,同时使蛋白质大分子水解成短肽和*基酸,从而有利于糖类和*基类物质进行复杂的美拉德反应。
3、中性蛋白酶通过采用生物工程技术,微滤、超滤膜分离及真空冷冻干燥技术,产品质量达到食品级和医药级的质量标准。
应用领域:
1、中性蛋白酶是一种无毒、无副作用的蛋白质,可应用于动植物蛋白的水解,AN%高,水解度高,风味佳,生产高级调味品和食品营养强化剂的HAP和HVP。
2、中性蛋白酶在焙烤行业领域用于制作饼干,可减少面团的混合时间和发酵时间,通过蛋白酶生物活性物质的酶促反应,将面团的蛋白质水解成胨、肽类甚至*基酸,同时减弱面团筋力,使它具有良好的可塑性和延伸性,保持清晰美观的印花图案。改善成品的光泽、使饼干断面层次分明,结构均匀一致,口感松爽酥脆。
3、中性蛋白酶应用于啤酒行业,可达到良好的澄清效果,也可与其它酶系进行复配成啤酒复合酶,澄清去苦味效果更佳。
酶活力定义:
紫外光分光度法:在测定条件(30±0.2℃;pH值7.5)每分钟水解酪蛋白释出的三*乙酸可溶物在275nm波长有吸光度与1微克酪*酸的吸光度相当时,所需的酶量即为一个活力单位,用u/g表示。
·细胞爬片抗原修复液(1X)
编号:QN1256
英文名称:Antigen Retrieval Solution,1×(for IHC)
规格:100mL|500mL
细胞爬片抗原修复液是一种特别适合用于细胞爬片的快速抗原修复液,只需室温孵育 5 分钟即可完成对细胞爬片样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。
使用说明:
1、细胞爬片固定后用 PBS 洗涤 3 次,每次 5min。
2、加入抗原修复液使其覆盖住细胞爬片,室温孵育 5min。
3、PBS 洗涤细胞爬片,重复 3 次,每次 5min。充分洗涤残留的 SDS,以免造成抗体失去活性。
4、封闭液封闭细胞爬片。
5、随后即可进行一抗孵育等后续的免疫染色步骤。
储存条件:室温 1年
ANNEXIN V- FITC/PI凋亡检测试剂盒现货促销关键词:ANNEXIN V- FITC/PI凋亡检测试剂盒,QN1317,Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit
·SABC免疫组化试剂盒(小鼠/兔IgG)(FITC)
编号:QN1221
英文名称:SABC(Mouse/Rabbit IgG)-FITC Kit
规格:100T-200T
本试剂盒适合于一抗为小鼠或者兔IgG来源的免疫组化实验,FITC荧光检测。
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex,SABC大约可形成一百个左右的FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的FITC将保证SABC具有很高的敏感性。
试剂盒组分:
封闭液(5% BSA)———————————10ml
Bio-羊抗小鼠/兔IgG浓缩液——————100ul
SABC-FITC浓缩液-——————————100ul
稀释液———————————————30ml
抗荧光衰减封片剂——————————10ml
操作步骤:以石蜡切片热修复为例
1. 切片常规脱蜡至水。
2. 可选步聚:
a、热修复抗原,将切片浸入0.01M 柠檬酸*缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.4)洗涤1-2次。
b、酶消化,滴加消化液,37℃10分钟,PBS(pH7.2-7.4)洗涤2-3次。
c、跳过此步,直接进入下一步。
3. 滴加5% BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。
4. 用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗,37℃ 孵育1小时左右或20℃ 2小时左右,也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
5. 根据使用量,用稀释液将Bio-羊抗小鼠/兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul Bio-羊抗小鼠/兔IgG浓缩液,混匀即成工作液,此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠/兔IgG工作液,20-37℃孵育30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。
6. 根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液,混匀即成SABC-FITC工作液,此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-FITC工作液,20-37℃孵育30分钟(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次,每次5分钟。
7. 滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
对于细胞爬片,固定后,PBS漂洗两次,再用0.5% Trxiton X-100室温孵育20分钟, PBS漂洗两次,接上述第3步。
对于冰冻切片,固定后,PBS漂洗两次,再接上述第2步。
注意事项:
如果背景过高,在SABC反应之后,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后封片观察。
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文献和实验Annexin V实验对照设置 Annexin V是常用的检测细胞凋亡的方法,一般通过流式细胞仪来检测。为保证实验结果的准确性,方便后续数据分析,通常需要设置不同对照实验组。 ①样本不带自发荧光: ②样本带自发荧光 空白对照:调节阈值和仪器电压。 阴性对照:排除实验操作对实验结果的影响,扣除荧光背景,同时还可以作为实验组划门的依据。 单阳对照:调节补偿,同时也可以辅助调节该通道的电压,防止信号超出仪器接受范围。 注意事项: *单阳对照组细胞一定要用明显有凋亡的细胞,因为调节补偿需要有足够
Q:Annexin V 凋亡检测试剂盒的原理是什么? A:Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的 PS 与凋亡早期细胞胞膜结合,将 Annexin V 标记荧光染料如 FITC 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或 7-AAD 可与双链 DNA 特异性结合,并产生强烈的荧光,正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性,核染料 PI 或 7-AAD
示例: Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h,FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后,流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞,Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况,检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法: 1) 选中所有颗粒,将FSC
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