北京pUCm-T载体促销

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百奥莱博专业生产供应北京pUCm-T载体促销，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：北京pUCm-T载体促销
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
英文名：pUCm-T vector
本产品是一种高效克隆PCR产物(TA Cloning)的专用载体。本载体由pUC系列载体改造而成，在pUC载体的多克隆位点处插入特殊的限制性内切酶识别位点，酶切后能在载体的3´端形成悬挂的“T”末端。很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA 每条链的3´端加上一个突出的碱基A。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT 配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到，pUCm-T载体中，形成含有目的片断的重组载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片断的重组克隆，大大提高了3´末端A 突出PCR产物的连接、克隆效率。本产品应用于进行TA 克隆，克隆PCR产物。对克隆后的PCR产物可以用M13通用引物进行DNA 测序。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一. 实验准备
1. PCR产物3´末端带有突出的A碱基：Taq、Tth、Ampli Taq、Klen Taq DNA聚合酶扩增的PCR产物3´末端均带有突出的A碱基。建议扩增的PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行回收，再进行连接转化实验。
2. PCR产物3´末端没有突出的A碱基：Pfu、Pwo、Tli或DeepVent等DNA聚合酶具有3´5´外切酶活性，其扩增的PCR产物末端可能不带有3´A，要对这种平末端PCR产物进行克隆，应先对其进行3´末端加A，再进行连接转化实验。

二.连接反应
3.在一个标准的10mL连接反应体系中，加入下列成分：

 

反应组分	10μl反应体系
插入的目的片段	xμL(0.2 pmol)
本产品	1μL(50 ng)
10×连接酶缓冲液	1μL
T4 DNA连接酶	3-5 U
补水到	10 L

 注意:一般最后加入T4 DNA连接酶。
4. 用移液器吹打反应混合液使之混匀后，16-23℃连接1～12小时(或按T4 DNA连接酶供货商提供的操作手册进行连接)。

三．细菌转化和鉴定
5. 将100μl感受态细胞置于冰上解冻后，完全解冻后轻轻将细胞均匀悬浮。
6. 加入上述5μl连接液，轻轻混匀，冰上放置30分钟。
7. 42℃水浴热激90秒，再冰上放置15～20分钟。
8. 加入400μl自备的SOC培养基，37℃ 200～250rpm振荡培养1小时。
9. 4000rpm离心5分钟，用枪头吸掉400μl上清液，用剩余的培养基将细胞悬浮。
10. 将细菌悬液均匀涂布在含20μl的IPTG(100mM)和100μl的X-gal(20mg/mL)的*苄青霉素抗性的自备的LB平板上。(涂布菌液的用量可以根据连接的效率及感受态细胞的转化效率而进行适当的调整。)
11. 将平板于37℃培养1小时，然后倒置培养过夜。(先将平板正向放置1小时，以吸收过多的液体。)

四．筛选
12.转化子的蓝白筛选：
 当外源DNA片段插入到pUCm-T载体中后，由于外源DNA的核酸序列存在改变了LacZ基因的编码，从而影响了其产物β-半乳糖苷酶α-片段的活性，因此重组克隆在-gal/IPTG 平板上呈现为白色，而非重组克隆呈蓝色。选择在IPTG/X-gal 平板上生长的白色菌落，用牙签挑至含*苄青霉素的液体培养基，37℃培养过夜。
13.转化子的鉴定：
1)用上述培养的白色菌落的菌液抽提质粒，用PstI单酶切或用其它合适的酶切,琼脂糖凝胶电泳检查片段大小，确定是否含有目的片段。
2)用M13通用引物或其它合适的引物直接进行测序来确定是否含有目的克隆。

操作提示：
1. PCR产物的纯度：
 连接反应前需用琼脂糖凝胶电泳检测PCR反应产物，如果电泳检测PCR产物条带弥散，或出现非特异条带，则需要切下目的条带，用胶回收试剂盒对目的片段进行回收。若PCR产物电泳检测只有预期大小的明显条带，也应使用PCR产物纯化试剂盒直接纯化PCR产物，以除去引物二聚体。不经纯化的PCR产物在某些条件下可直接用于连接，但由于引物二聚体和PCR产物中其它物质的影响，造成含有插入片段的阳性克隆数减少，因而需要筛选很多克隆方可得到含有目的PCR产物的阳性克隆。
2. 平端PCR产物
 具有校正活性的热稳定性DNA聚合酶如Pfu、Pwo、Tli在进行PCR扩增时产生平端PCR产物。这种平端PCR产物可以进行3´末端加A 尾后连接到pUCm-T载体中，采用这种方法进行连接，可大大提高克隆的效率。
3.优化插入片段和载体的摩尔比
1)pUCm-T载体优化的插入DNA片段和载体的摩尔比为3:1，采用3-10:1的连接比例也可成功进行连接。如果你的PCR产物开始连接的不理想，则有必要优化连接比例。
2)PCR产物的量可采用以下公式进行换算：
PCR片段的量(ng)= [加入载体的量(ng)×插入片段大小(kb)/载体大小(kb)]×插入片段和载体的摩尔比
4.筛选含插入片段的转化子
插入片段成功克隆到pUCm-T载体中，可阻断β-半乳糖苷酶的编码序列，因而重组克隆可在指示培养基上通过颜色进行筛选。大多数情况下含有PCR产物的克隆菌为白色，如果PCR片段和LacZ基因在同一读码框内，即PCR片段碱基数是3的整数倍(含3´-A)，并且读码框无终止密码子，则重组克隆菌可能为蓝色。

质粒图谱：


除北京pUCm-T载体促销外，我公司正在打折促销以下产品：

·ATP依赖的DNase
编号：BTN120510
英文名称：ATP Dependent Dnase
规格：200U
在含有ATP的Buffer反应体系中，本产品能够特异性地水解线性双链DNA产生脱氧核糖核酸，但对环状双链DNA不起作用。本产品可用于除去质粒或粘粒等环状DNA样品中残留的少量线性基因组DNA片段的污染，减少对后续实验的影响。在基因工程实验中，制备的质粒和粘粒，即使是通过*化铯/*乙锭梯度离心方法或其它严格的方法制备，也常含有碱裂解操作过程中带来的少量细菌基因组DNA片段的污染，尤其在制备低拷贝克隆载体的质粒或粘粒等时，这种现象更为明显，使用本产品即可以有效的去除这些污染。

产品特点：
1．使用本制品可以有效除去样品中的基因组DNA，然后通过70℃、5 min的加热处理即可使酶完全失活，从而减少基因组污染物对质粒或粘粒等的常规分析、亚克隆和序列测定等后续实验结果的影响。
2．此产品可用于低拷贝的质粒或粘粒的提取及除去质粒等环状DNA中线性基因组DNA污染物。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：以线性化的pMD18 DNA为底物，在1mM ATP存在、pH9.4缓冲液中，37℃反应30分钟，催化生成1nmol脱氧核苷酸所需要的酶量，定义为1活性单位。在10μL反应体系中，加入本产品0.2 U，10×ATP依赖的DNA酶Buffer 1μL，0.2μg的线性化的pMD18 DNA，在37℃条件下反应30分钟，能够使线性化的pMD18 DNA产生95%以上的降解作用。

使用方法：
使用本产品除去 pUC18质粒中含有的大肠杆菌基因组DNA片段污染物(占60%)，可以提高阳性克隆的比率。

1．在微量离心管中配制下列反应液：

成分	样品	对照
10×反应Buffer	1μL	1μL
pUC18质粒DNA混合物	1μg	1μg
ATP依赖的DNA酶	2U	-
dH2O	Up to 10μL	Up to 10μL

2．37℃反应2小时。长时间反应效率有下降的倾向，建议反应时间1～2小时。
3．70℃加热5分钟，使ATP依赖的DNA酶失活。
4．在微量离心管中制备下列酶切反应液：

成分	用量
10×H Buffer(客户自备)	1μL
第3步反应液	5μL
EcoR I(客户自备)	30U
dH2O	Up to 10μL

5．37℃反应1小时之后，进行60℃ 15 min反应，使EcoR I失活。
6．在微量离心管中制备下列连接反应液：

成分	用量
10×T4 DNA Ligase Buffer(客户自备)	1μL
第5步酶切反应液	2μL
T4 DNA Ligase(客户自备)	350 U
dH2O	Up to 10μL

7．16℃反应1小时。

取上述连接反应液2～10μL，转化到JM109感受态细胞中，涂平板培养，进行蓝白菌落筛选并计数。实验结果表明，使用ATP依赖的DNA酶处理的pUC18质粒DNA混合物(含60％大肠杆菌基因组DNA片段)的自连结果中，白色菌落减少80%以上，有效抑制了大肠杆菌基因组DNA的污染。



北京pUCm-T载体促销关键词：BTN160101,pUCm-T vector,pUCm-T载体

BL0944 生物素化羊抗猪IgG抗体
ARB11326 人胆碱磷酸甘油酯(PC/CPG)酶联免疫定量检测 Human choline phosphoglyceride,pc/cpg ELISA KIT
十二烷基肌*酸*溶液(10%)   100ml
6%兔红细胞 100ml
ARB10034 人I型前胶原C末端肽(CICP)Elisa分析 Human cross-linked c-teloPeptides of type i collagen,cicp ELISA KIT
ARB13096 小鼠毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M2(M-AChRM2)含量分析 Mouse muscarinic acetylcholine receptor m2,m-achrm2 ELISA KIT
BTN51104 B载体 Magic Vector B
丙泊酚 Chromium picolinate 2078-54-8
70-18-8 L-Glutathione reduced　 还原型谷胱甘肽
ARB11933 大鼠17-酮类固醇(17-KS)ELISA代测服务 Rat 17-ketosteroids,17-ks ELISA KIT
9068-59-1 中性蛋白酶
转移核糖核酸(酵母) Z-L-Isoleucine
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BTN80906 一站式大提柱式miRNAOUT Maxi Column miRNAOUT
ARB10163 人TGF-β诱导早期基因1(TIEG1)ELISA代测服务 Human tgf-beta-inducible early response gene-1,tieg1 ELISA KIT
FMOC-L-甲硫*酸 o-Phthalic acid 71989-28-1
ARB13867 猪白介素10(IL-10)Elisa分析 Porcine interleukin 10,IL-10 ELISA KIT
磷脂酰乙醇胺 Eosin Y sodiu*(代"m") salt water soluble 39382-08-6或90989-93-8
ARB13698 兔尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)酶联免疫定量检测 Rabbit urokinase plasminogen activator,upa ELISA KIT
ARB13021 小鼠谷*酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)elisa检测 Mouse glutamic acid decarboxylase autoantibody,gad-ab ELISA KIT
BTN131078 天然蛋白A Native Protein A
PY01-152  a-糜蛋白酶(12000u/mg)  1克  
F020235 兔抗人γ链抗体 Rabbit Anti-Human IgG (γ chain)
13292-46-1 Rifampicin   利福平
司他夫定 DL100 3056-17-5
碘化*溶液(NaI,6mol/L)   100ml
BTN50901 菌落PCR试剂盒2.0 Colony PCR Kit 2.0
SJ0741 人白细胞分离液
ARB13894 猪传染性胸膜肺炎抗原(PCP-Ag)代做ELISA实验 
BTN80815 BCA法蛋白定量试剂盒 BCA Protein Assay Kit
68-26-8 Vitamin A  维生素A
ARB11879 人激肽释放酶10(KLK 10)免费代测 Human kallikrein 10,klk 10 ELISA KIT
2,5-二羟基*甲*(代"酸") Fmoc-D-Ala-OH 490-79-9
QuantScript RT Kit 

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