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495
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Animal DNA extraction kit(Million base pairs)
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长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
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阴凉干燥
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应百万碱基级动物DNA提取试剂盒 DNA纯化,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:百万碱基级动物DNA提取试剂盒 DNA纯化
品牌:百奥莱博
规格:10次
产地:国产|进口
英文名:Animal DNA extraction kit(Million base pairs)
编号:BTN130929
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百万碱基级动物DNA提取试剂盒 DNA纯化关键词:Animal DNA extraction kit(Million base pairs),百万碱基级动物DNA提取试剂盒,BTN130929
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百万碱基级动物DNA提取试剂盒 DNA纯化关键词:Animal DNA extraction kit(Million base pairs),百万碱基级动物DNA提取试剂盒,BTN130929
·一站式miRNA柱式提取试剂盒
编号:BTN80104
英文名称:One-stop miRNA column extraction kit
规格:50次
本试剂盒是目前国内外市场上最快速最简单的小RNA分离纯化产品。
试剂盒特点:
1.一步法直接分离纯化小RNA,比两步法(先分离总RNA和再纯化其中的小RNA)和PAGE电泳回收法更简单。得到的小RNA长度大部分在200nt以下,包括5S RNA、tRNA、miRNA、Pre-miRNA、pri-miRNA、siRNA、shRNA和snRNA等。
2. 柱式操作,比miRNA提取试剂盒更加简单快捷,整个过程只需要十多分钟。
3.适用范围广,可以用于动物组织、血液及部分植物组织等实验材料。
4.小RNA 纯净,OD260/280一般都在1.9以上。
5.产率一般为20-40μg/100mg动物组织。
6. 无基因组DNA的污染。
7.可用于RT-PCR、miRNA 标记、microarray等后续实验。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 25ml |
| 溶液B | 25ml |
| 溶液C | 50ml |
| 离心吸附柱 | 100套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| RNA洗脱液 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
由于离心吸附柱的吸附量限制,本产品每次提取只能处理100mg左右的各种组织,可以在1.5mL塑料离心管中。如果处理样品量大,请分成很多相当于微量提取的量进行,最后再收集在一起。
1. 新鲜配制裂解液。将溶液A和溶液B按1:1的比例混合,然后根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用。注意:溶液A和溶液B混合后必须立即使用,不要放置,否则会产生沉淀。
a)对贴壁细胞:吸尽培养液,在每10平方厘米细胞中加入1mL新鲜配制的裂解液,用枪轻柔吹打数次,确保细胞全部裂解。
b)对悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,在每1-5×106 悬浮细胞中加入1mL新鲜配制的裂解液,用枪轻柔吹打数次,确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell,1mL 新鲜配制的裂解液的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜的动物组织:先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中,每50-100mg 组织加1mL 新鲜配制的裂解液,用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA),建议组织的使用量不要超过50mg/mL裂解液,否则十分容易产生DNA污染。
d)对新鲜的植物组织:先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中,每50-100mg 组织加1mL 新鲜配制的裂解液,用匀浆器匀浆30秒左右。
e)对 RNAhold 保存动物或植物组织:先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块,放入10mL或15mL塑料离心管中,每50-100mg组织加1mL新鲜配制的裂解液,用匀浆器匀浆30秒左右。
2. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中,然后加入0.2倍体积的自备*仿(1mL裂解物需0.2mL *仿),振荡器上充分振荡混均30秒。
3. 12000~15000g室温离心3~5分钟。
4. 将上清液(约0.6-0.8mL)转移到一根离心吸附柱中以去除大RNA(最好标记以跟后面要用的专门吸附小RNA的另一离心吸附柱区别开来,本试剂盒提供的离心吸附柱之间没任何区别,可以随机选一个做大RNA 吸附,另一个做小RNA 吸附)。注意:离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质,避免触及,否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见,可以留下100μL上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行,否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
5. 12000~15000g室温离心半分钟,收集管中的穿透液。大RNA 及DNA将与离心吸附柱的膜结合,小RNA 将存在于穿透液中。但由于离心吸附柱的最大吸附能力为40μg动物RNA,20μg植物RNA,如果样品中的大RNA含量高于上面数值,则穿透液中将同时含有大RNA和小RNA,在此情况下,穿透液需要再次重复上柱以去除大RNA。由于此时离心吸附柱已经吸附了大RNA,所以需要预处理(具体步骤见本手册最后的附录)。
6.在最后得到的不含大RNA的穿透液中加等体积的溶液C,混匀。此时溶液的总体积约1.5mL。
7. 先转移约0.75mL 到一新的离心吸附柱中。注意:不要使用已经使用过的、用来吸附大RNA的离心吸附柱。12000~15000g室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。
8. 将上步上柱剩余的样品转移到离心吸附柱中,12000~15000g室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。
9. 加 0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12000~15000g室温离心半分钟,弃穿透液。
10. 加 0.3mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12000~15000g室温离心半分钟,弃穿透液。此步一般可以省略。
11. 12000~15000g室温离心半分钟以甩出残联液体。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会影响miRNA的使用。
12. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中,加入50-100μLRNA 洗脱液。
13. 12000~15000g室温离心半分钟,离心管中溶液即为miRNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
附录:
1. 将结合有大RNA和DNA的离心吸附柱中加入0.1mL自备的超纯水,12000~15000g室温离心半分钟,弃收集液。
2. 再加 0.1mL自备的超纯水,重复上步一次。
3. 将第5 步的得到、需要进一步去除其中大RNA和DNA污染的穿透液直接上柱,12000~15000g室温离心半分钟,收集穿透液(此穿透液含小RNA)。
4. 如果大 RNA 已经去干净,可以直接进入第6 步;如果大RNA 没有去除干净,则用本附录1-2的方法处理离心吸附柱,然后再将此穿透液加入(接本附录第3 步)。一般样品只需要额外处理一次就可以去除全部的大RNA污染。
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