北京BTN120520型大肠杆菌OrigamiB(DE3)化

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应北京BTN120520型大肠杆菌OrigamiB(DE3)化学感受态细胞现货供应，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：北京BTN120520型大肠杆菌OrigamiB(DE3)化学感受态细胞现货供应
英文名：E.coli OrigamiB(DE3) Chemical Competent Cell
规格：10*100μl
品牌：百奥莱博
 本产品是采用大肠杆菌Origami B(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达107。本感受态细胞具有卡那霉素和四环素抗性。
 菌株基因型为：F-ompT hsdSB(rB- mB-)gal dcm lacY1 ahpC(DE3)gor522::Tn10trxB(KanR,TetR)。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

北京BTN120520型大肠杆菌OrigamiB(DE3)化学感受态细胞现货供应极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·SB培养基
编号：BTN100822
英文名称：Super Broth Medium，Powder
规格：250g
SB培养基所含的Peptone和Yeast Extract分别比LB高220%和300%。同样培养条件下能得到更多菌体，常用于质粒制备和蛋白质表达。配制一升液体培养基需要25g本产品。

储存条件：常温运输及保存，有效期两年。

·即用型PCR试剂盒(含染料)
编号：BTN90805
英文名称：Instant PCR MasterMix
规格：1ml×10|5mL×20
本产品内含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂、上样染料等所有PCR所需要的成分，用户只需加入模板和引物即可进行PCR反应，具有广泛的用途。

产品特点：
1.扩增效率和灵敏度更高。
2. 方便，用户只需准备模板和引物既可以进行PCR实验。
3.快捷，操作步骤已经最大限度地简化，能减少污染，降低实验误差。
4.产物可直接用于T载体克隆，不需要额外的加A反应。
5.染料单独提供，方便客户组合。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：(以30μL的标准PCR反应体系为例)
在一干净的PCR管中，加入下列成分：

 

试剂		加入量
PCR MagicMix		15μl
DNA模板(自备)	哺乳动物基因组DNA	0.5-1μg
	酵母基因组DNA	5-500ng
	细菌基因组DNA	0.5-50ng
	质粒DNA	5-500pg
	PCR回收片段	1-100pg
PCR引物(自备)		10pmol each
补水到		30μL

放入PCR仪中进行PCR,结束后取5-10μL直接上样电泳，按照1.0mL PCR MagicMix加入40μL专用染料的比例将40μL专用染料加入到1mL PCR MagicMix中
注意：
1．如果反应体系不是30μL，各成分需要等按比例增加或减少。
2．如果DNA模板中有PCR不明抑制物(植物、土壤和血液等DNA样品常含此类抑制物)，可以在PCR体系中加入1/10的PCR抑制物清除剂(BTN60804，30μL体系中加3uL)，可能会对PCR有帮助。

PCR反应的影响因素
变性温度与时间：模板变性温度是决定PCR反应中双链DNA解链的温度，达不到变性温度就不会产生单链DNA模板，PCR也就不会启动。变性温度低则变性不完全，DNA双链会很快复性，因而减少产量。变性温度太高，又会影响酶的活性。一般情况下可设为94℃ 20~30秒，高温时间应尽量缩短，以保持耐热DNA聚合酶的活力，最高变性温度不宜超过95℃。
退火温度与时间：退火温度决定PCR特异性与产量。温度高特异性强，但过高则引物不能与模板牢固结合，DNA扩增效率下降；温度低产量高，但过低可造成引物与模板错配，非特异性产物增加。合适的退火温度一般在45~68℃之间。设置特定反应的最适退火温度，可根据引物的(G+C)%含量进行推测，一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为30~60秒，足以使引物与模板之间完全结合，长时间退火没有必要。
延伸温度与时间：PCR反应的延伸温度一般选择在70~75℃之间，延伸时间根据所用聚合酶扩增速度和扩增片段大小设定，如同样扩增2 Kb片段，若使用Taq酶只需1分钟，使用Pfu酶则应设定2分钟以上。延伸时间过长会导致非特异性扩增带的出现，时间太短则可能得不到扩增产物或得到一些短的非特异性片段。
循环次数：可根据模板DNA的量、扩增片段的大小和扩增产物的下步应用等因素，设定20-40个循环。循环次数太少，扩增量不足，如果循环次数太多，错配几率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。
酶量：50μl反应体系可用0.5-5 U酶，酶量的选择与模板DNA的量，扩增片段大小等有关，酶量过多易发生非特异性反应，而且可能增加突变的机率，尤其在进行高保真扩增时，应尽量减少酶量，但酶量过少时反应性能下降。
模板：模板可以是单链DNA，也可以是双链DNA，质粒DNA的扩增效率略低于线状DNA。模板加量一般不需太多，不超过1μg为宜，因为加量过多可能导致非特异性扩增增加，但是要考虑模板中靶序列的含量。例如，使用基因组为模板扩增单拷贝或低拷贝靶序列，就需要适当加大模板用量。
引物：引物与模板配对的长度应至少为17个核苷酸，最高不宜超过30个核苷酸，最佳长度为20~24个核苷酸，如需插入酶切位点，应在酶切位点5´端多加几个碱基，有利于酶切。引物的(G+C)%含量组成应均匀，尽量避免含有相同的碱基多聚体。两个引物中(G+C)%含量应尽量相似。引物内部应避免形成明显的次级结构，如发夹结构。两个引物之间不应发生互补，特别是在引物3´端。如果可能，引物3´端最好富有GC，这样退火后有利于引物3´端的延伸。人工合成的引物最好经过色谱层析纯化或PAGE纯化，以除去未能合成至全长的短链等杂质。引物的终浓度一般为0.1-2μm左右，浓度太高会导致非特异性扩增，太低则扩增产物太少。


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·中pH缓冲液套装
编号：BTN100829
英文名称：Medium pH Buffer Set
规格：30次
Native-PAGE，非变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳是目前电泳法分离非变性蛋白质的主要方法，实验过程杜绝变性剂接触目的蛋白质，常用于同工酶的鉴定和提纯。本产品可快速制备分离胶，不含SDS，并确保配制分离胶的精确pH值。

产品组成：

成份	规格(30次*)
4×浓缩胶配胶液(pH5.5)	100ml
4×分离胶配胶液(pH7.5)	200ml
中pH电泳液(pH7.0)	10L(干粉)
5×中pH上样液	1ml
使用手册	1份

*注：1次是指的一次mini-Gel电泳

储存条件：常温运输及保存(5×中pH上样液需要-20℃保存)，有效期为一年。

·Zenker固定液
编号：BTN131223
英文名称：Zenker Fixative Solution
规格：250mL
Zenker固定液是常用的混合型固定液，是细胞学及病理学常用的固定剂之一，由重铬酸*、生汞、乙酸和水混合而成。用该固定液固定的组织，细胞核及细胞浆染色十分清晰，特别是要显示免疫球蛋白、病毒包涵体(如Negri小体)、骨骼肌的横纹等组织时，应用本液可获得良好的结果。

产品特点：
1．Zenker固定液对细胞核固定效果较好，较适合于造血和网状内皮组织等样品的固定。
2．Zenker固定液不能用于保存细胞颗粒，红细胞及含铁血黄素。对含血量较多的组织标本不建议使用Zenker液固定。
3．常作为三色染色的组织固定剂，在三色染色中还作为媒染剂使用。
4．固定时间一般需要12-24小时。

产品组成：

成分	规格
溶液A	250ml
溶液B	15ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
1．配制适量体积的Zenker 固定液，按照19:1的比例将溶液A和溶液B混合，搅拌均匀，所得溶液即为Zenker 固定液工作液。注：Zenker 固定液工作液建议即配即用。
2．标本修块，置入Zenker 固定液工作液内固定12～24h(根据样品材料、大小不同，固定时间可能会有较大差异)。
3．固定后，用流水冲洗12h，或者亚硫*(代"酸")*溶液冲洗，也可用1%的*水溶液洗涤。在70%酒精脱水时加入碘(配成0.5%碘酒)脱汞。
4．常规方法脱水、透明。

注意事项：
1．由于Zenker 固定液中含*化汞，固定后必须脱汞。
2．固定后，组织必须用流水冲洗去除重络酸*否则乙醇脱水会引起络显色。
3．本固定液不能用金属容器盛放，组织固定后，也不能用金属镊夹取。


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明胶水溶液(5%,无菌)   100ml
ARB10312 人巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)elisa检测说明书 Human macrophage colony-stimulating factor,m-csf ELISA KIT
褪黑素 Paraffin oil 73-31-4
TGMD溶液   100ml
ARB10839 人抗肾上腺皮质抗体(AAA)含量检测 Human anti-adrenocortical antibody,aaa ELISA KIT
002014 EDTA抗凝兔血
ARB13664 兔可溶性凋亡相关因子(sFAS/Apo-1)定量分析 Rabbit soluble factor-related apoptosis,sfas/apo-1 ELISA KIT
PY02-005A  麦康凯琼脂(不含结晶紫)  250克  
5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯 BIS-TRIS 150347-59-4
ARB13561 兔子可溶性E选择素(sE-selectIn)酶联免疫定量检测 Rabbit soluble e-selectin,se-selectin ELISA KIT
DNA碱性转移缓冲液   500ml
98-92-0 Nicotinamide  烟酰胺(维生素pp)
5-氮胞苷 DL-Lysine monohydrochloride 320-67-2
ARB12394 大鼠单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)代做ELISA实验 Rat monocyte chemotactic protein 3,mcp-3 ELISA KIT
BL0838 羊抗人IgA纯化抗体
CV0501 通用T载体菌落PCR鉴定试剂盒
HC0046 1.8ml冻存管外旋
ARB11988 大鼠L选择素(L-Selectin/CD62L)含量检测 Rat l-selectin ELISA KIT

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