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- 百奥莱博
- BTN140384-OIZ
- 北京
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
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- 库存：
719
- 英文名：
E.coli GV3101 Chemical Competent Cell
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")农杆菌GV3101化学感受态细胞 克隆与表达，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。
名称：农杆菌GV3101化学感受态细胞 克隆与表达
规格：10×100μL
品牌：百奥莱博
编号：BTN140384
英文名：E.coli GV3101 Chemical Competent Cell
产地：国产|进口
本产品为GV3101农杆菌化学感受态细胞，其具有利福平和庆大霉素抗性，适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率高达104cfu/μg。
基因型：C58(rifR)Ti pMP90(pTiC58DT-DNA)(gentR/strepR)Nopaline。
储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期一年。
自备试剂：质粒DNA、液氮等
使用方法：
转化前准备
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在 28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化。
2. 无菌条件下，向刚刚融化的感受态细胞悬液中加入需要转化的质粒，每100μL感受态细胞加1μg质粒DNA，轻柔混匀。冰水浴中静置10分钟。
3. 将离心管置于液氮中速冻 5分钟(注：也可以用干冰和无水乙醇混合物替代液氮)。
4. 迅速将离心管置于37℃水浴静置中5分钟，不要晃动水面。然后快速转至冰水浴中静置5分钟。
5. 加入800μl 无抗生素的2×YT或LB液体培养基，28-30℃振荡培养2~3小时。使菌体复苏，表达抗性。
6. 5000rpm离心1分钟收菌，保留100μl左右上清，轻轻吹打重悬菌体，均匀涂布到含有相应抗生素的LB 固体培养基平板上，待平板中的液体完全吸收后，倒置平板，28-30℃培养48-72小时。
注：当平板只含有50μg/mL kan时，28℃培养48小时即可；平板中同时加入50μg/mL kan，20μg/mL rif时，需 28℃培养 60h；如果使用的平板含有50μg/mL rif 则需要 28℃培养 72-90小时。
注意事项：
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10 ；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 利福平浓度不应高于25μg/μL，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有 50μg/mL kan，若所用平板含有 20μg/mL rif 则转化效率降低到1/2。
5.培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止 Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。
6.相关抗生素配方：
| 抗生素 | 配方 | 原液 | 工作液 |
| 羧苄青霉素(carb) | 双蒸水溶解 | 50mg/mL | 50μg/mL |
| 硫*(代"酸")卡那霉素(kan) | 双蒸水溶解 | 50mg/mL | 50μg/mL |
| 链霉素(strep) | 双蒸水溶解 | 10mg/mL | 50μg/mL |
| 利福平(rif) | DMSO溶解 | 10mg/mL | 20μg/mL |
| 庆大霉素(gent) | 双蒸水溶解 | 20mg/mL | 40μg/mL |
更多有关农杆菌GV3101化学感受态细胞 克隆与表达的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：
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农杆菌GV3101化学感受态细胞 克隆与表达关键词：E.coli GV3101 Chemical Competent Cell,BTN140384,农杆菌GV3101化学感受态细胞
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农杆菌GV3101化学感受态细胞 克隆与表达关键词：E.coli GV3101 Chemical Competent Cell,BTN140384,农杆菌GV3101化学感受态细胞
·HRP标记内参抗体(β-actin)
编号：BTN130592
英文名称：HRP Conjugated Loading Control Antibody(β-actin)
规格：20μL
本产品包含三种最常用的HRP标记内参抗体，β-actin-HRP-Mouse mAb(BTN130592)、GAPDH-HRP-Mouse mAb(BTN130593)、β-Tubulin-HRP Mouse mAb(BTN130594)，该系列抗体无需二抗孵育，可缩短实验周期，节约实验成本，大幅降低背景信息强度。
抗体类型：小鼠IgG1
应 用：Western blotting
建议浓度：1:1000～10000
交叉反应性：人，大鼠，小鼠
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。
·cl857 Sam7 λDNA(非甲基化)
编号：BTN90407C
英文名称：Lambda DNA
规格：5μg
本产品Lambda DNA(λDNA)为λ噬菌体中的DNA，是一种常见的DNA底物，分子量为31.5×106Da/48502bp，浓度为200～500μg/ml。A型为普通Lambda DNA。B型为不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型为非甲基化的cl857 Sam7 λDNA，是从感染的大肠杆菌GM119菌株中分离得到的。该菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作为对DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。
储存溶液：Tris-HCl(pH8.0)10mM；EDTA 1mM
储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。
纯度：
1. OD260nm/280nm＞1.8。
2. 琼脂糖凝胶电泳出现清晰单一条带。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保温16小时后，琼脂糖凝胶电泳时出现清晰单一条带。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃，2小时)后，在琼脂糖凝胶电泳时出现8条清晰的DNA电泳带。
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