大肠杆菌DH10B电击感受态细胞价格

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应大肠杆菌DH10B电击感受态细胞价格，产品信息：

类别：克隆与表达

英文名：E.coli DH10B Electroporation-Competent Cell

产品名	产品编号	包装规格
大肠杆菌DH10B电击感受态细胞	BTN160901	50μL×5

英文名：E.coli DH10B Electroporation-Competent Cell

规格：50μL×5

品牌：百奥莱博

编号：BTN160901

 本电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。DH10B菌株来源于MC1061菌株，mcrA、mcrBC 及mrr突变使DH10B菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(无论真核生物还是原核生物的基因组DNA 都能被高效的转入DH10B中)。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。φ80dlacZΔM15 标记的存在使DH10B可用于蓝白斑筛选，rpsL 赋予其链霉素抗性。DH10B电击感受态细胞适用于大质粒的构建或者各种文库构建。本感受态细胞经特殊工艺制作，经 pUC19质粒检测，转化效率>1010cfu/μg。

 菌株基因型为：[F-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1endA1 araD139 Δ(ara，leu)7697 galE15 galK λ- rpsL nupG。

 

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

 

自备试剂：目的DNA、SOC培养基等。

 

使用方法：

1. 将0.1 cm的电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的DH10B电击感受态细胞插入冰中5分钟，待其融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。(注：对于质粒，测定转化效率使用1μl 10 pg/μL的对照质粒pUC19；对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液(10mM Tris HCl，pH7.5; 1mM EDTA)重悬，DNA浓度不超过100 ng/μL，体积不超过5μL/50μL感受态。)

3. 用 200μl 枪头(用刀切除0.5 cm 枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。

4.启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=2.4 kV(此为BioRad电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作)，将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。

5. 向电击杯中加入700μL 不含抗生素的无菌培养基 SOC.，混匀后转移到空EP 管中，37℃，200rpm 复苏60分钟。

6. 5000rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200μL 涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。平板上(因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少13小时。

 

注意事项：

1. 加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。

2.电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。

3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。

4.电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。

5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

6. 对于连接产物转化，最好转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液(10mM Tris HCl,pH7.5; 1mM EDTA)重悬产物，保证DNA浓度不超过100 ng/μL。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。

7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。

8.转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

9.电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。

大肠杆菌DH10B电击感受态细胞价格专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

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编号	类别	名称
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BTN130847	RNA纯化	柱式白色念球菌RNA提取试剂盒
BTN130874	蛋白质研究	人玻连蛋白
BTN140410	其他细胞生物学试剂	Flemming固定液
BTN131119	蛋白质研究	HRP稳定剂/稀释剂
BTN90704	RNA纯化	土壤微生物RNA提取试剂盒
BTN131007	蛋白质研究	中等RIPA裂解液
BTN70909	核酸扩增(PCR)	PCR级绿如蓝DNA染料
BTN130915	核酸扩增(PCR)	dCTP溶液(2.5mM)
BTN130910	工具酶	长片段Taq DNA聚合酶
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BTN100839	核酸扩增(PCR)	PCR级甲酰胺
BTN120619	核酸扩增(PCR)	dGTP溶液(100mM)
BTN80101	DNA纯化	一管式病毒DNA-RNA提取试剂盒
BTN100823	干粉培养基	SOC培养基
BTN130873	工具酶	TEV蛋白酶
BTN90613	蛋白质研究	动物细胞核蛋白微量制备试剂盒
BTN80807B	蛋白质研究	动物细胞裂解液B(变性)
BTN131292	其他细胞生物学试剂	PFG固定液
BTN100910	蛋白质研究	长效期SDS-PAGE还原剂
BTN130887	蛋白质研究	植物叶绿体蛋白提取试剂盒
BTN120682	克隆与表达	杆菌肽溶液
BTN131226	其他细胞生物学试剂	Karnovsky固定液

 

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