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365
- 英文名:
E.coli DH5α Chemical Competent Cell
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半年
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北京百奥莱博科技有限公司
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-80℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")大肠杆菌DH5α化学感受态细胞促销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:大肠杆菌DH5α化学感受态细胞促销
规格:0.1mL*10
品牌:百奥莱博
英文名:E.coli DH5α Chemical Competent Cell
产地:国产|进口
编号:BTN81024
本产品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株,其φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶*基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。使用pUC19质粒检测,转化效率不低于107,适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。
本菌种来源于Hoffman-Berling 1100菌种。
| 基因型 | 表现型 |
| deo R | 组成型合成脱氧核糖 |
| end A1 | 核酸内切酶I缺失 |
| gyr A96 | 具有*啶酮酸抗性 |
| hsd R17 | 限制性酶EcoK缺失 |
| △(lac)U169 | lac基因缺失 |
| rec A1 | DNA重组活性降低 |
| Rel A1 | 允许在无蛋白质合成时有RNA合成 |
| sup E44 | 抑制琥珀突变突变,为某些噬菌体必需 |
| thi-1 | 不能自身合成硫* |
| φ80(lac ZΔM15) | 提供α-互补所需的ω片断 |
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击90秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入800μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,200rpm(小于225rpm)振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意事项:
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm ,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
我公司的大肠杆菌DH5α化学感受态细胞促销,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
37348-90-4 两性电解质4-6
102029-73-2 乙酰辅酶A Acetyl coenzyme A
三磷酸脱氧核糖核苷酸 Z-L-Alanine
β-*酚紫 Okadaic acid sodiu*(代"m") salt 7143-21-7
BTN130960 超螺旋DNA分子量标准 Supercoiled DNAMETER
BL0628 赖*酸-琼脂糖凝胶4B lysine Sepharose 4B
ARB12141 大鼠生长激素释放肽ghrelIn(GHRP-GhrelIn)Elisa定量检测 Rat growth hormone releasing Peptide-ghrelin,ghrp-ghrelin ELISA KIT
糖原PAS染色液(真菌专用) 3×20ml|3×50ml
DL-高*丙*酸 2′-dI 1012-05-1
HC0117 透析袋MD27 ( 截留量500)
Tween20/TBS溶液(20×TBST,pH8.0) 500ml
ARB11366 人前列环素(PGI)定量分析 Human prostacycline,pgi ELISA KIT
甘*酸* D-Serine 35947-07-0
蛋白酶抑制剂混合物(细菌蛋白提取) Protease inhibitor mixture(for Bacterial protein extraction) 1ml
大肠杆菌DH5α化学感受态细胞促销关键词:E.coli DH5α Chemical Competent Cell,BTN81024,大肠杆菌DH5α化学感受态细胞
·SSPE溶液,20×
编号:BTN100809
英文名称:Saline-Sodium Phosphate-EDTA
规格:250mL
20×的SSPE含3M NaCl、0.2M NaH2PO4、0.02M Na2EDTA,pH为7.4。它是一种在核酸分子杂交中广泛使用的溶液。其特点首先是盐浓度接近饱和,可以非常方便地稀释到不同浓度,提供不同的杂交和洗涤严谨度。其次,高盐浓度可以抑制微生物生长,便于长期放置。最后,它可以用于几乎所有核酸杂交试验。由于缓冲能力比SSC强,更适合于需要稳定pH的实验。
储存条件:常温运输及保存、有效期两年。
·dGTP溶液(2.5mM)
编号:BTN130914
英文名称:dGTP Solution(2.5mM)
规格:2mL
dGTP分子式为C10H13N5O13P3Na3,分子量是507.2,消光系数为13.7×103 M-1×cm-1(pH7.0)。λmax为253nm。
储存条件:低温运输和-20℃保存、有效期一年。
·植物专用蛋白酶抑制剂
编号:BTN130528
英文名称:Protease Inhibitor for Plant
规格:1mL
本产品为植物蛋白酶抑制混合液,溶剂为DMSO。组织/细胞裂解时会释放出大量的内源性蛋白酶,引起蛋白质的降解,影响试验结果。加入外源性蛋白酶抑制剂,抑制蛋白酶的活性,防止蛋白降解,已经成为蛋白质研究的常规操作。
产品特点:
1. 即开即用,不需要单独购买每个成分再配制。
2.含有AEBSF、bestatin、E64、leupeptin、pepstatin A、0-phenanthroline等蛋白抑制剂。
3. 入到植物裂解液中,能特异性抑制丝*酸蛋白酶 、半胱*酸蛋白酶、天门冬*酸蛋白酶、金属蛋白酶和*基肽酶的活性,维持蛋白的完整性。
4.与各种植物细胞裂解液兼容。
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法:
临用前震荡混匀植物专用蛋白酶抑制剂(100×),按照1mL本产品:30g植物细胞所得的裂解液的比例,将本产品加入到植物细胞裂解液中,混匀,裂解植物细胞,并继续后续的实验操作。
大肠杆菌DH5α化学感受态细胞促销关键词:E.coli DH5α Chemical Competent Cell,BTN81024,大肠杆菌DH5α化学感受态细胞
·增强型DAB显色试剂盒
编号:BTN81223
英文名称:Enhanced DAB Chromogenic Kit
规格:100mL
增强型DAB显色试剂盒中含有检测辣根过氧化物酶(HRP)的所有试剂,适合于检测各种印迹膜上标记的HRP。其反应原理是HRP可以催化底物DAB在目的蛋白所在的位置转变为深褐色的化合物,可根据颜色的有无和深浅来检测HRP的存在与否或存在量,进而推测HPR标记物识别的靶分子的位置及含量。该反应的示意图如下:
产品特点:
1.即开即用,不需要用户准备任何材料。
2.DAB以干粉提供,方便运输。
3.可用于各种印迹膜(包括Southern、Northern、Western印迹膜)和免疫组化中的组织切片。免疫组织显色后还可用Nuclear fast red复染。
4.跟PVDF膜、尼龙膜兼容。
5.显色过程中需要避光,在显色后可拍照或扫描。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| DAB干粉 | 100mg |
| 10mL棕色塑料瓶 | 1个 |
| DAB溶解液 | 100ml |
| 增强剂 | 1ml |
| H2O2 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
注意:本产品可以配制100mL增强型DAB显色液,但其具体使用次数根据跟印迹膜的大小密切相关。
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期1年
自备试剂:超纯水、HRP标记物(抗体或探针)处理过的印迹膜。
使用方法:
1.从DAB溶解液中取5mL到一个10mL的棕色塑料瓶中(本试剂盒提供),将100mg DAB干粉全部加入,充分振荡混匀,所得溶液即是20×DAB浓缩液。此溶液如果一次不能用完,可以分装成小管在-20℃避光放置6个月。
2.按每cm2印迹膜需要0.1mL DAB显色液的比例计算所需显色液的量,并按下表配制DAB显色液(此处以配制10mL为例,用户如需要配制其他体积,可按比例增减各成分用量):
| 成分 | 用量 |
| DAB溶解液 | 9.4ml |
| 20×DAB浓缩液 | 0.5ml |
| 增强剂 | 0.1ml |
| H2O2 | 10μl |
注意:此溶液必须立即使用。
3.如果是印迹膜,则迅速将印迹膜转移到上步得到的DAB显色液中,室温避光静置。待印迹膜上出现满意的条带时(一般需要2-3分钟,最长不超过10分钟,具体跟靶分子浓度密切相关),迅速将印迹膜转移到盛有超纯水的托盘中摇晃,终止显色反应。数分钟后需要换水,共三次。用吸水纸吸干印迹膜上的水分,照相处理后避光干燥保存印迹膜。
4.如果是组织切片,则直接将DAB染色液滴加在切片上,室温避光放置10分钟,然后浸在超纯水中数次,空气中干燥后显微镜下检测或照相。
北京百莱博科技有限公司是克隆与表达产品的专业生产供应销*(代"售")商,恭候您的咨询选购大肠杆菌DH5α化学感受态细胞促销。
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文献和实验法、 CaCl2、 RuCl等化学试剂法感受态细胞:处理后,细胞膜的通透性发生变化,成为能容许外源 DNA 分子通过时细胞的状态。转化细胞(转化子):带有异源 DNA 分子的受体细胞( Transformant )。本实验以 E.coli DH5α 菌株为受体细胞,用 CaCl2 处理受体菌使其处于为感受态,然后与 pUC18质粒共保温,实现转化。 pUC18质粒携带有抗氨苄青霉素的基因,因而使接受了该质粒的受体菌具有抗氨苄青霉的特性,用 Apr符号表示。将经过转化后的全部受体细胞经过适应稀释,在含氨
7 的缓冲液来洗脱;洗脱液提前预热至 65℃ 也可以提高洗脱效率。 3. 提取质粒转化大肠杆菌效率低 大肠杆菌转化效率受到多种因素的影响,例如感受态细胞状态,转化方式及操作(电转或热激),质粒用量,质粒质量等等。从感受态角度优化,可以考虑感受态本身的状态,比如贮存时间、贮存方式不当会导致感受态转化效率明显降低,此外热激条件也会影响感受态转化效率,建议热激时间严格按照感受态类型或说明书操作。从质粒角度优化,可以进一步确认质粒用量,质粒浓度,质粒是否降解等。 4. 提取质粒转染细胞效率低
酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。 2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。 (三)获得含重组表达质粒的表达菌种 1、将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。 2、测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。 3、以此重组质粒DNA转化表达
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