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文献和实验实验42 乙醇酸氧化酶活性测定（比色法） 原理 乙醇酸氧化酶在光呼吸作用中起重要的作用，在它的作用下将乙醇酸氧化生成乙醛酸和过氧化氢，反应如下： 如果我们以二氯靛酚作为氢受体，接受乙醇酸氧化时脱下的H ，使二氯靛酚还原，此时原来为蓝色的染料则褪至无色，其反应如下： 利用染料颜色的变化，即可对酶的活性进行比色
一、原理与目的 多酚氧化酶是植物组织内广泛存在的一种含铜氧化酶，植物受到机械损伤和病菌侵染后，PPO催化酚与O2氧化形成醌，是组织形成褐变，以便损伤恢复，防止或减少感染，提高抗病能力。醌类物质对微生物有毒害作用，所以伤口醌类物质出现是植物防止伤口感染的愈伤反应，因而受伤组织一般这种酶的活性就会提高。多酚氧化酶也可与细胞内其他底物氧化相偶联，起到末端氧化酶的作用。 PPO的存在是水果、蔬菜褐变及营养丧失的主要原因之一。PPO氧化内源的酚类物质生成邻醌，邻醌再相互聚合成醌或蛋白质、氨
粉末，此粉末即为丙酮粉。 2.酶液制备：称取1g丙酮粉，加入20ml 0.025mol/L磷酸缓冲液 ( pH7.2)，0℃下用磁力搅拌器匀浆30min，在12 000rpm下离心30min，取上清液，得粗酶提取液。 (2)多酚氧化酶(PP0)的纯化 向上述酶液中加入NH4SO4至为80%饱和溶液， 搅拌30min, 过夜，于12 000g离心30min，沉淀溶于0.025mol/L磷酸缓冲液中(pH7.2), 对10mmol/LTris-HCl溶液(pH8.3)透析
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