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鹿森生物
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1支
phi29 DNA Polymerase,即phi29 DNA聚合酶,是一种重组表达纯化的源于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis噬菌体phi29的DNA聚合酶。phi29 DNA聚合酶具有DNA链置换 (strand displacement) 活性和很强的DNA连续合成能力(processive synthesis property),可以合成超过70kb的长度,常用于在体外进行不依赖于热循环的等温DNA扩增(isothermal DNA amplification,也常简称为等温扩增)。
phi29 DNA Polymerase具有很强的链亲和力,单次聚合反应可以实现长度超过70kb的连续聚合延伸,从而适合用于对全基因组进行稳定扩增。phi29 DNA Polymerase虽然可以扩增线状或者环状的双链DNA,但其底物倾向于是单链DNA或单链RNA。phi29 DNA Polymerase具有3'→5'外切酶活性,因此可保证扩增反应的高保真性。
用途:phi29 DNA Polymerase可用于高保真等温PCR、滚环复制(Rolling Circle Replication,RCA),多重置换扩增(Multiple Displacement Amplification,MDA)和单细胞、病原微生物以及宏基因组(metagenome)的全基因组扩增(Whole Genome Amplification,WGA)、干血斑样本扩增DNA、单细胞基因组扩增、SNP基因分型和STR/微卫星分析等。phi29 DNA Polymerase还可应用于protein-primed DNA扩增、RNA-primed DNA扩增,以及致死基因的无细胞体系的克隆等相关实验。
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文献和实验(3 ,4 ). In the present protocol, we describe an improvement on the efficiency of site-directed mutagenesis by PCR using the Pyrococcus species GB-D polymerase instead of the commonly used Thermus aquatiqus (Taq) polymerase. Taq polymerase lacks a 3′→5′ proofreading
在RT-PCR中避免DNA污染(Avoiding DNA Contamination in R
extraction (TRI Reagent®), a filter-binding based extraction (RNAqueous®), by centrifugation through a CsCl cushion, and by two rounds of oligo d(T) selection using Ambion's Poly(A)Pure™ Kit (see Figure 1a). Regardless of whether reverse transcriptase
polymerase enzyme. The primers match some sequence in the target DNA. The solution is rapidly heated to DNA denaturing temperatures (~95°C) and cooled to a temperature where the polymerase can function. Each thermal cycle generates copies of the sequence
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